为什么普通的聚合酶能扩，高保真酶pfu不能扩啊

为什么普通的聚合酶能扩，高保真酶pfu不能扩啊

可能是引物问题，或者做个镁离子浓度梯度看看

高保真Pfu对于模板二级结构比较复杂的情况适用性比较差，我在实验中也遇到过与你相同的问题，对于这种情况单纯改变PCR扩增反应条件是无法改变实验结果的，因为最主要的影响因素酶还是没有改变，如果待扩增的区段比较长（>2000bp）的话那么推荐使用TaKaRa公司的LA Taq酶，该酶对于具有复杂二级结构的模板适应性非常好同时其具有3'-5'核酸外切酶活性，可以纠正扩增过程中出现的错配，属于高保真聚合酶。

很奇怪的哈？。。

pcr有时候非常敏感，换台机器都不行。试试touch down吧。

.
还是使用基因工程筛出来的更好的酶比较有效，
现在很多大牌生物公司都有自己的专利产品，
我用的是 TaKaRa PrimerStar HS，
速度和扩增效率同Taq一样，保真性超过Pfu ，
非常好，就是比较贵，一套500￥。
.

退火温度72℃也可以了。
注意Pfu酶延伸速度低于Taq，请适当延长延伸时间。
还有注意体系里面加没加镁。
酶浓度增加一倍试试。不行的话换一管酶看。
换新酶试过了么？