您好。。。我最近的PCR扩的产物成弥散状，但是能看见目的条带，这是怎么回事啊，我之前试条件时都没有弥散

答案:2 悬赏:20 手机版

解决时间 2021-03-23 04:36

提问者网友：焚苦与心
2021-03-22 20:43

最佳答案

五星知识达人网友：woshuo
2021-03-22 22:14

可能性超多的
如果是同一个模版，同一个引物，同一条件的PCR，考虑模版/引物/buffer是否污染，引物是否时间比较久有降解。
Mg浓度/退火温度是否有改变？考虑降低Mg或者提高退火温度减少非特异扩增。
电泳缓冲液不干净也可能会使条带变难看。追问是这样的，DNA不同（但别人扩的就没有拖带），酶，缓冲液都是新的。引物前天我扩的都很好（当时扩的很少，就几个样）。条件没变。追答如果你再随机挑少量几个样品扩增：还有问题的话，建议你微调PCR的Mg或退火温度条件；如果少量样品没有问题，可能是你在做大量样品的时候时间比较长，引起降解或酶活性降低，注意一直在冰上操作哦。

可以直接割胶回收纯化之后酶切，如果你之后要连接载体作克隆的话，还是建议你再优化条件，单一条带最好。

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1楼网友：胯下狙击手
2021-03-22 23:42

电泳糟的一个电极极是不是有损坏追问你有QQ吗。。。如果有能加下我吗474873808

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