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如何将贴壁细胞驯化成悬浮培养

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解决时间 2021-04-12 01:51
如何将贴壁细胞驯化成悬浮培养
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贴壁细胞分为两种,上皮细胞型和成纤维细胞型,在显微镜下观察时,贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形,而且晃动培养液时,细胞不动.
悬浮细胞漂在培养液中,呈圆形,晃动培养液时细胞也随着漂动。
所谓的贴壁培养是指大多数动物细胞在离体培养条件下都需要附着在带有适量正电荷的固体或半固体的表面上才能正常生长,并最终在附着表面扩展成单层。其基本 操作过程是:先将采集到的活体动物组织在无菌条件下采用物理(机械分散法)或化学(酶消化法)的方法分散成细胞悬液,经过滤、离心、纯化、漂洗后接种到加 有适宜培养液的培养皿(瓶、板)中,再放入二氧化碳培养箱进行培养。用此法培养的细胞生长良好且易于观察,适于实验室研究。但贴壁生长的细胞有接触抑制的 特性,一旦细胞形成单层,生长就会受到抑制,细胞产量有限。如要继续培养,还需将已形成单层的细胞再分散,稀释后重新接种,然后进行传代培养。
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首先贴壁转悬浮驯化:搅拌瓶硅化,在搅拌力作用下使细胞完全适应悬浮培养 再降血清驯化,逐步降低血清浓度至无血清培养
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