镍柱纯化蛋白为什么加pmsf和dtt

镍柱纯化蛋白为什么加pmsf和dtt

PMSF为蛋白酶抑制剂，在纯化过程中，为了防止细菌本身的蛋白酶降解待纯化的目的蛋白，通常在破碎菌体，上柱的过程中会加PMSF。使用时请注意防护，有毒。
DTT为二硫苏糖醇，一般加在平衡上柱缓冲液和洗脱缓冲液中，纯化的目的蛋白天然结构如果有二硫键，那么在纯化这类蛋白时，推荐加入DTT，但用镍柱纯化时，浓度要低，1mM就够了。