关于RNA干扰
答案:2 悬赏:60 手机版
解决时间 2021-05-25 03:04
- 提问者网友:箛茗
- 2021-05-24 20:20
在过渡载体上重组上两个干扰片段后,将干扰片段双酶切至干扰载体过程中,为什双酶切切不出想要的条带,切出来的是很奇怪的条带?猜测是干扰片段插入片段的方向出了问题(因为在设计干扰片段时,将双酶切位点设计到引物中了),请问除了测序之外,有什么方法可以知道插入方向?谢谢
最佳答案
- 五星知识达人网友:深街酒徒
- 2021-05-24 20:38
1L的,这个还没到RNA干扰的范畴吧,顶多就是停留在分子生物学。
你用什么方法在过渡载体上重组两个干扰片段的呢?你提到了引物,那么似乎是标准的PCR酶切连接的方法。那么如果你设计的双酶切不是同尾酶的话,连接方向是不可能出问题的,反过来连不上啊。
你可以检查一下你的引物和模板,如果确认设计的方向没问题的话,插入方向是不会有问题的。无需测序。
酶切出来条带奇怪,有可能是酶切本身的原因。比如你用的什么酶?会不会有星号活性?你的过渡载体上会不会有多个你用到的酶的切点?
如果不涉及保密内容,不妨稍微详细的介绍一下你的实验方法,大家一起讨论=)
全部回答
- 1楼网友:末日狂欢
- 2021-05-24 21:49
没有别的方法 除非你知道进入细胞的RNA会关闭哪一种表现性状的基因
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