350字英语求翻译

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在SBP1编码序列及STM1 PCR技术，获得了使用酿酒酵母基因组DNA为模板。 PCR产物已在59和39结束，分别NdeI和切酶切割的网站。碎片受到限制，在出口的宠物插入- 15B条产生的PET - SBP1和pET - STM1的His6表达质粒标记Sbp1p和Stm1p。
HMT1可以在实验室（陈省身等。2002年）。这是插入到公共广播，手机（黄等。1999年），以取代不改变大肠杆菌的蛋氨酸氨肽酶启动子序列（MAP）的基因的编码区（公共广播，马普- hmt1）。与地图基因启动子HMT1然后从公共广播扩增马普- hmt1成一个网站中插入pGEX诺蒂- STM1质粒，这是11个核苷酸39条STM1终止密码子。在串联的STM1和HMT1基因，然后扩增引物59和39载NdeI和BamHI位点，分别为。开始的PCR产物与STM1开始在59个密码子，并到年底的PET - 15B条载体产生聚脂STM1（马普- hmt1插入）。关于在PET - 15B条编码His6矢量标记序列之间的NcoI和NdeI网站。因此，STM1表示为N末端的His6 -标签下的T7启动子控制的融合蛋白。最后，在PET - STM1 -（马普STM1 - hmt1）是与Sbp1p/hmt1生产SBP1取代（聚脂SBP1 - [MAPphmt1]，图。1）。此外，在上述的质粒（聚脂SBP1，宠物，STM1，宠物，STM1 - [马普- hmt1]和pET - SBP1 - [马普- hmt1]）中提到的表达凝血酶裂解位点的精氨酸残改为与赖氨酸残基。定点的凝血酶裂解位点及Stm1p R236K，R237K，R240K，并R243K代诱变突变体进行了有快速转换定点突变试剂盒（Stratagene）根据制造商的说明。
大肠杆菌BL21（DE3）中细胞蛋白表达作为主机使用。与质粒转化细胞生长在30℃至文化达到600纳米的0.6吸光度Lauia肉汤。异丙基的BD - 1 -半乳糖苷当时说（经IPTG，终浓度为1毫米）和细胞培养为4小时收获前。细胞裂解后，重组蛋白的亲和力与镍（Novagen）螯合珠纯化根据制造商的指示。

SBP1和STM1的编代码序列被PCR得到使用S. cerevisiae基因组的脱氧核糖核酸阿斯样扳.PCR产品在59和39末端分别有NdeI和XhoI尖刻的地点.碎片是限制级和变为pET- 15b附着为His6-给Sbp1p和Stm1p加上标签的表达产生 pET-SBP1和pET-STM1质粒.HMT1是在实验室中可用的(Chern等等2002).它被把插入pBS-MP(Hwang等等1999),不改变 E.共同里蛋氨酸氨基肽酶((MAP)基因((pBS-MAPp-hmt1)的促进者序列取代编代码地区.有地图促进者was那时的 HMT1基因从pBS-MAPp-hmt1扩大和把一向STM1的停止密码子是11核苷酸39的pGEX-STM1质粒的地点插入NotI.在纵列二马拉的双轮马车中STM1和HMT1基因是那时,随着分别带着NdeI和BamHI地点59和39初步知识扩大.PCR产品在59末端以开始开始密码子的STM1和变为pET-15b矢附着产生pET-STM1-((MAPp-hmt1).有关将His6-标签编码pET-15b矢序列是在NcoI和NdeI地点之间.因此,STM1作为一受到一个T7促进者的控制N-终端His6-标签熔化蛋白质被表达.最后, 在pET-STM1-(MAPp-hmt1)was上STM1用SBP1为代替Sbp1p/hmt1生产((pET-SBP1-[MAPphmt1],Fig. 1).此外,在在所有当中表达质粒的凝血酶分裂地点上精氨酸残渣在上方提到(pET-SBP1,pET-STM1,pET-STM1-[[MAPp-hmt1]和 pET-SBP1-[[MAPp-hmt1)]被用一赖氨酸残渣代替.凝血酶分裂地点和产生Stm1p R236K,R237K,R240K和R243K突变体的地点-导演突变形成被地点-导演有的QuickChange执行根据manufacturer’s指令突变形成配套元件 ((Stratagene).E.共同里BL21((DE3)细胞被使用作为主人为蛋白质表达.直到文化在600 nm达到一吸光率的0.6,用质粒改变细胞被在Lauia原汁清汤肉汤阿特30°C中长出.异丙基b-D-1-thiogalactopyranosid e was then added (IPTG, 1 mM final concentration) and cells were cultured for 4 h before harvesting. After cell lysis, the recombinant proteins were affinity purified with Ni2 chelating beads (Novagen) according to the manufacturer’s instructions.

在SBP1编码序列及STM1 PCR技术，获得了使用酿酒酵母基因组DNA为模板。 PCR产物已在59和39结束，分别NdeI和切酶切割的网站。碎片受到限制，在出口的宠物插入- 15B条产生的PET - SBP1和pET - STM1的His6表达质粒标记Sbp1p和Stm1p。
HMT1可以在实验室（陈省身等。2002年）。这是插入到公共广播，手机（黄等。1999年），以取代不改变大肠杆菌的蛋氨酸氨肽酶启动子序列（MAP）的基因的编码区（公共广播，马普- hmt1）。与地图基因启动子HMT1然后从公共广播扩增马普- hmt1成一个网站中插入pGEX诺蒂- STM1质粒，
这是11个核苷酸39条STM1终止密码子。在串联的STM1和HMT1基因，然后扩增引物59和39载NdeI和BamHI位点，分别为。开始的PCR产物与STM1开始在59个密码子，并到年底的PET - 15B条载体产生聚脂STM1（马普- hmt1插入）。关于在PET - 15B条T载体的编码序列
他的His6 -标记之间的NcoI和NdeI网站。因此，STM1表示为N末端的His6 -标签下的T7启动子控制的融合蛋白。最后，在PET - STM1 -（马普STM1 - hmt1）是与Sbp1p/hmt1生产SBP1取代（聚脂SBP1 - [MAPphmt1]，图。1）。此外，对1凝血酶裂解位点精氨酸残
上述的质粒（聚脂SBP1，宠物，STM1，宠物，STM1 - [马普- hmt1]和pET - SBP1 - [马普- hmt1]）中提到的表达当地雇员被取代了赖氨酸残基。定点的凝血酶裂解位点及Stm1p R236K，R237K，R240K，并R243K代诱变突变体进行了有快速转换定点突变试剂盒（Stratagene）根据制造商的说明。
大肠杆菌BL21（DE3）中细胞蛋白表达作为主机使用。与质粒转化细胞生长在30℃至文化达到600纳米的0.6吸光度Lauia肉汤。异丙基的BD - 1 -半乳糖苷当时说（经IPTG，终浓度为1毫米）和细胞培养为4小时收获前。细胞裂解后，
重组蛋白亲和镍（Novagen）螯合珠纯化根据制造商的指示。