(9分)通过基因工程的方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并获得成功表达。棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管

(9分)通过基因工程的方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并获得成功表达。棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管通道将毒蛋白基因送入胚囊，进而导入尚不具备细胞壁的合子或早期胚体细胞中，借助天然的种胚系统，形成含有目的基因的种胚。请回答下列问题：
(1)下列所示的黏性末端是由 （2分）种限制酶作用产生的。

(2)利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，此过程是基因工程操作步骤中的第三步，即 。获取目的基因时，如果基因比较小，核苷酸序列又已知，则可以通过DNA合成仪用化学方法直接 。
(3)该目的基因在导入受体细胞前需要与载体结合，目前经常使用的载体是 。
(4)基因工程操作的第四步是目的基因的检测与鉴定，其中分子水平的检测又分三步：首先要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用的技术是 ；其次还要检测 ，方法同样是采用分子杂交技术；最后检测 ，方法是 杂交。4 （2）将目的基因导入受体细胞 人工合成

(答案→)4 （2）将目的基因导入受体细胞 人工合成 解析：(1)据图分析限制酶的识别序列为GAATT、CAATT、GTTAA、CTTAA这4种，而酶具有专一性，故需4种不同的限制酶。(2) 基因工程操作步骤中的第三步为将目的基因导入受体细胞，植物基因工程中一般利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞。如果基因比较小，核苷酸序列又已知，则可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。(3)基因工程的操作工具中常用的运载体有质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等，目前经常使用的是质粒。(4) 基因工程中分子水平上的检测的方法有：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。

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