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用pcr产物测的序列片段,一定能够在里面找到引物序列吗?

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解决时间 2021-03-11 14:51
用pcr产物测的序列片段,一定能够在里面找到引物序列吗?
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如果是扩增已知序列目的全长基因,肯定是要在基因序列外部设计引物,当然接下来还有克隆表达等操作,最好在引物设计时考虑增加酶切位点以及添加序列标签等。如果是扩增未知序列基因,一般要根据序列比对找到保守序列,设计兼并引物,扩增产物一般是目的基因的部分序列,还要通过3"、5‘race以及染色体步移等操作得到全长序列。
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应该能找到啊,电泳看看?
如果是用上下游引物做的PCR,产物中就有引物序列,但有的测序恭喜测序时会把引物序列去掉,只保留目的基因的序列,只要你的测序的目的基因的比对正确,应该就可以认为未突变
很多情况下不能,在测序时用你的引物进行测序的,读取的数据是你引物后的序列,引物序列不能被读取,所以不包含引物序列,要想有引物序列信息,需要将PCR产物克隆进载体,用载体上的引物测序。
测序是读不出引物的,而且引物后的几十个碱基都读不好。想测出引物,或者克隆,或者再设计引物。
你想找到引物序列的话最好进行双向测序(但你的片段最好不要大于800不然就算双向测也无法测通最后还是找不到引物)
如果你只是进行了单向测序的话,那么找不到引物是很正常的,因为测序是从引物后边的序列开始的,并且开头的几十个碱基也是不可信的,所以如果LZ你只是进行了单向测序,那么找不到引物是正常的事情
如果LZ你的片段小于800的话进行双向测序后就可以找到引物了。
如果比800大那么LZ可以分别从F和R方向上的结果中设计个引物往回测。
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