多重pcr引物设计的原理有哪些

多重pcr引物设计的原理有哪些

1、多杀性巴氏杆菌的Km t 及toxA 基因 T +Pm具有Km t 及toxA 基因 T Pm具有Km t基因 PCR引物：
P1: 5′- A TC CGC TA T TTA CCC A GT GG-3′ P2: 5′-GCT GTA AAC GAA CTC GCC AC-3′ P3: 5′- CTT A GA TGA GCG ACA A GG-3′ P4: 5′- GAA TGC CAC ACC TCT A TA G-3′ 引物P1，P2检测Pm,扩增片段为457bp; 引物P3，P3检测T +Pm，扩增片段为864bp.
退火温度56℃，时间30秒
2、禽多杀性巴氏杆菌基因序列（U51470） 引物：
上游引物：5’-TGC CAA AGT TGC CAA TAC TCC-3’ 下游引物：5’-TCC CGT CCT CAT TTC TTG CG-3’
退火温度45℃，时间1分钟
3、猪巴氏杆菌
参考GenBank中猪巴氏杆菌序列设计引物
上游PAS1：5’-AgggCACgCAggCggACTTTTA-3’ 上游PAS2：5’-ATCgACAgCgTTTACAgCgTggA-3’
退火温度56.5℃，时间1分钟
4、致病性嗜水气单胞菌（ 嗜水气单胞菌标准株Ah10501）
究针对GenBank 中登录的致病性嗜水气单胞菌的溶血素基因( hlyA ) 、气溶素基因( aerA ) 以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S rRNA 保守区设计了3 对特异性引，非致病性分离株均未扩增出毒力基因hlyA 和aerA ,而致病性分离株则至少含有hlyA 基因