电泳条带清晰，为什么却无法测序

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解决时间 2021-03-08 14:56

提问者网友：温旧梦泪无声
2021-03-07 15:14

电泳条带清晰，为什么却无法测序

最佳答案

五星知识达人网友：逐風
2021-03-07 16:30

你知道你的目的片段的序列吗？看是否有str位点？如果有且为杂合子的话就无法直接用PCR产物测序，但可以通过转载体解决。琼脂糖凝胶电泳的分辨率较低，所以即使条带清晰，相差几个到十几个碱基也是无法区分的。还有就是你的测序引物是你的PCR引物吗？可以考虑设计专门的测序引物来测序，这样就可以避免因为非特异扩增而导致的测序结果较乱。如果知道了目的序列，就拿目的序列来设计，如果不知道，那就看你的现在的测序结果，找你的说法，应该是开始的碱基测序结果较好，那么你可以通过这些测序较好的碱基序列来设计测序引物。
另外，你拿到测序结果了吗？如果拿到了，那么就看你的测序峰形图，如果存在STR位点，测序应该是到一个位置后开始出现杂峰，但前面的峰较好，杂峰也是比较有规律的，至少刚开始出现杂峰的位置是，你可以看到两个平行的峰，他们缝间距是比较固定的，这样通常就是STR位点了。通常的解决办法就是转载体。
（仅供参考）

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1楼网友：持酒劝斜阳
2021-03-07 16:44

我也遇到过类似的问题，pcr结果显示条带明亮，但测序结果却是混合物。估计还是引物特异性的的问题，测序pcr条件不一定

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