为什么加入磁珠的量不同,筛选片段不同
答案:2 悬赏:30 手机版
解决时间 2021-02-22 14:05
- 提问者网友:像風在裏
- 2021-02-21 14:25
为什么加入磁珠的量不同,筛选片段不同
最佳答案
- 五星知识达人网友:渡鹤影
- 2021-02-21 14:51
buffer中成分量不同,磁珠吸附的片段大小不同。具体参考链接网页链接
全部回答
- 1楼网友:春色三分
- 2021-02-21 15:00
一氪生物磁珠法核酸纯化试剂
1纯化反应干扰物
干扰物有高浓度蛋白、BSA,这两种物质会导致磁珠聚沉,从而影响纯化效率,需要添加SDS处理后进行纯化。
2片段选择性能准确性干扰物
干扰物有yichun,异Bing醇,聚乙er醇,会影响片段选择回收效果,需要上调或下调磁珠使用量。
3回收片段大小限制:
大小范围为100bp-20kb,超范围片段回收效率将显著降低。
4应用范围限制:
仅用于常规分子生物学反应溶液中的DNA的纯化,磁珠不含裂解细胞及蛋白成分,不可用于组织、细胞、血浆等生物样本的DNA提取。
5原有过膜纯化方法更换为磁珠纯化方法可能带来的预期外影响
磁珠法纯化不同于过膜法纯化的原理,在替换的过程中可能预见的问题主要有:
1)磁珠法纯化中,纯化产物会存在痕量的反应液残留。
2)纯化片段大小可能发生变化
评价检测方法:
1)杂质残留影响,建议进行试用评估及测试,检测最终结果。
一般的二代测序文库构建过程中,末端修复、3‘端加A、及接头连接反应中应用磁珠法纯化,痕量残留不会对后续反应造成影响。
2)有特殊片段大小需求的情况下,可根据目标片段大小选择适宜的纯化磁珠用量。
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