蛋白质质谱分析具体流程有些细节不是很理解的上来问下,蛋白质组学通过2DE分离蛋白后,把感兴趣的点酶解

蛋白质质谱分析具体流程有些细节不是很理解的上来问下,蛋白质组学通过2DE分离蛋白后,把感兴趣的点酶解

肽指纹图谱：每个蛋白都有理论上消化后所得出的不同肽段,这些肽段的质量（分子量）就是这个蛋白的肽指纹图.当一个未知蛋白被酶解,用质谱可以检测出其中所含有几乎所有肽段的质量.然后把这些质量与数据库中已知的所有蛋白指纹进行匹配.匹配分值高过一定的 就可以认为索要坚定的蛋白就是那个目的蛋白.步骤：2DE 切点 消化 送入质谱仪分析 质谱仪自动获得质量数 送入数据库进行搜索 得出结果.关键：要知道质谱仪是用于检测小分子质量的仪器,只可以检测质量.======以下答案可供参考======供参考答案1:质谱技术在蛋白质组学中的应用 王海龙杨静祁振国岳秀兰 (包头医学院生物化学与分子生物学教研室，内蒙古包头014010；赤峰市第一医院’) 中图分类号(}so3 文献标识码A 文章编号1006—740X(2006)02—0231一o3 蛋白质组学是后基因组时代的一个新领域，它通 过在蛋白质水平上对细胞或机体基因表达的整体蛋白 质的定量研究，来揭示生命的过程和解释基因表达控 制的机理⋯ 。蛋白质组学分为表达蛋白质组学(Ex· pression Proteomies)和细胞图谱蛋白质组学(Cell Map Pmteomies)，前者指细胞和组织表达的蛋白质的定量 图谱，它依赖二维凝胶电泳图谱和图像分析，它能在整 体蛋白质水平上研究细胞的通路，以及疾病、药物和其 它生物刺激所引起的紊乱，因此它可能发现疾病标志 和阐明生物通路；后者是指通过纯化细胞器或蛋白质 复合物，用质谱鉴定蛋白质组分，确定蛋白质和蛋白质 相互作用的亚细胞位置 】。9O年代以来随着人类基 因组计划的实施，引发了生物信息学(Bioinformaties) 的发展，使蛋白质分析发生了革命性的变化。现在将 高分辨2一维电泳、高灵敏度的生物质谱和快速增长 的蛋白质和DNA数据库三者结合起来，为高通量的蛋 白质组学(High throughout Proteomies)铺平了道路 。 这里主要介绍质谱技术在蛋白质组学中的应用。 收稿日期：2006-03-02 作者简介：王海龙(1951一)，男。大学，副教授。 l 质谱技术的发展历史 1．1 质谱的开发历史要追溯到2O世纪初，Thomson 创制的抛物线质谱装置，1919年Aston制成了第一台 速度聚焦型质谱仪，成为了质谱发展史上的里程碑。 最初的质谱仪主要用来测定元素或同位素的原子量， 随着离子光学理论的发展，质谱仪不断改进，其应用范 围也在不断扩大，到2O世纪5O年代后期已广泛地应 用于无机化合物和有机化合物的测定。现今质谱分析 的足迹已遍布各个学科的技术领域，在固体物理、冶 金、电子、航天、原子能、地球和宇宙化学、生物化学及 生命科学等领域均有着广阔的应用。质谱技术在生命 科学领域的应用更为质谱的发展注入了新的活力，形 成了独特的生物质谱技术。 1．2 基本原理质谱(Mass Spectrometry)是带电原 子、分子或分子碎片按质量的大小顺序排列的图像。 质谱仪是一类能使物质离化成离子并通过适当的电 场、磁场将它们按空间位置、时间先后或者轨道稳定与 否实现质量比分离，并检测强度后进行物质分析的仪 器。质谱仪主要由分析系统、电学系统和真空系统组 成 。 用于分析的样品分子在离子源中离化成具有不同 质量的单电荷分子和碎片离子，这些单电荷离子在加 1 J 1 J 1J 1掩J rL rL r L r L 维普资讯 https://www.cqvip.com 232 包头医学院学报 第22卷 速电场中获得相同动能并形成一束离子，进入由电场 和磁场组成的分析器，离子束中速度较慢的离子通过 电场后偏转大，速度快的偏转小；在磁场中离子发生角 速度矢量相反的偏转，即速度慢的离子依然偏转大，速 度快的偏转小；当两个场的偏转作用彼此补偿时，它们 的轨道便相交于一点。与此同时，在磁场中还能发生 质量的分离，这样就使具有同一质量比而速度不同的 离子聚焦在同一点上，不同质量比的离子聚焦在不同 的点上，其焦面接近于平面，在此处用检测系统进行检 测即可得到不同质量比的谱线，即质谱。通过质谱分 析，我们可以获得分析样品的分子量、分子式、分子中 同位素构成和分子结构等多方面的信息 J。 2 质谱技术种类 2．1 电喷雾质谱技术(Electrospray ionization Mass Spectrometry，ESI—MS) 是在毛细管的出口处施加一 高电压，所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化 成细小的带电液滴，随着溶剂蒸发，液滴表面的电荷强 度逐渐增大，最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷 的离子，致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进 入气相⋯ 。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子 而不是碎片离子，使质量电荷比降低到多数质量分析 仪器都可以检测的范围，因而大大扩展了分子量的分 析范围，离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电 荷数算出。电喷雾质谱的优势就是它可以方便地与多 种分离技术联合使用 j。 2．2 基质辅助激光解吸附质谱技术(Matrix Assisted Laser Desorption／Ionization，MALDI) 基本原理是将 分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射 晶体时由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量 蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，致使基质和分 析物膨胀并进入气相。MALDI所产生的质谱图多为 单电荷离子，因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的 质量有一一对应关系。MALDI产生的离子常用飞行 时间检测器来检测，理论上讲，只要飞行管的长度足 够，检测器可检测分子的质量数是没有上限的，因此质 谱很合适对蛋白质、多肽、核酸和多糖等大分子的研 究。 2．3 快原子轰击质谱技术(Fast Atom Bomebardment Mass Spectrometry，FABMS) 一种软电离技术，是用快 速隋性原子射击存在于底物中的样品，使样品离子溅 出进入分析器，这种软电离技术适于极性强、热不稳定 的化合物的分析，特别适于多肽和蛋白质的分析研究。 FABMS只能提供有关离子的精确质量，从而可以确定 样品的元素组成和分子式。而FABMS—MS串联技术 的应用可以提供样品较为详细的分子结构信息，从而 使其在生物医学分析中迅速发展起来 ]。 2．4 同位素质谱技术是一种开发和应用比较早的 技术，被广

对的，就是这个意思