零下40度保存了2年的cDNA还可以用吗，会不会降解严重

零下40度保存了2年的cDNA还可以用吗，会不会降解严重

western测细胞培养中的细胞株蛋白较为多用，而免疫组化主要用于组织切片，放免我没有做过，不过有所耳闻，与ELISA的用途差不多一致，主要是测定溶液当中的蛋白质浓度。放免貌似灵敏度比ELISA高很多，但由于放射性的危险性，在ELISA能够检测到的情况下一般还是选用ELISA。Western跟免疫组化相比，能够半定量地在不同样本之间比较，这一点的话在免疫组化当中，必须差别较大才能够判断结果，免疫组化在测试表达水平的方面很不灵敏。但是免疫组化也能够提供western所不能的一些信息，比如阳性细胞在组织中的分布，甚至目标蛋白在细胞当中的分布。这两种方法的最重大差别是，western告诉你体外，免疫组化告诉你体内，western告诉你量，免疫组化告诉你分布。RT-PCR和Northen blot都是测mRNA,但Northen近年貌似很少人用了，一大原因可能是它没有扩增的步骤，灵敏度很低，本身表达不多的mRNA片断不容易测到，再来RNA超爱降解，RT-PCR把它逆转录为cDNA，解决了这一问题，而Northen就仍然为此所苦。此外还听说Northen用到的对人体有害的试剂较多，也造成研究人员不愿选用。

rna不纯化做反转录，cdna容易降解. 是的，得到的是全体mrna的cdna的库。然后通过pcr手段获得需要的目的片段。但是实际操作过程中，由于mrna的降解，因此一次实验不可能得到全部的cdna,因此要重复1~2次，才能保证全部mrna被反转录为cdna. 核糖核酸（缩写为rna，即ribonucleic acid），存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。rna由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。rna的碱基主要有4种，即a腺嘌呤、g鸟嘌呤、c胞嘧啶、u尿嘧啶，其中，u（尿嘧啶）取代了dna中的t。