叶绿素的吸收光谱

叶绿素的吸收光谱

叶绿素含有2种呀，请看下面的
叶绿素a在645nm和663nm 处均有吸收，在645nm处吸光系数较小，为16.75，在663nm 处较大，为82.04；叶绿素b 在645nm和663nm 处亦都有吸收，但在645nm处吸光系数较大，为45.60，在663nm 处较小，为9.27。由此可知：叶绿素a的吸收峰值出现在663nm 处，该吸收曲线延伸到645nm处，在此波长处的吸收系数不如在663 nm 处大，因此在计算公式中求算叶绿素a的含量时，需扣除叶绿素b在663nm和645nm 处的吸光度值，再进行计算。
标准分析方法要求，叶绿体色素提取液不可浑浊，在710nm或750nm波长下测量吸光度，其值应小于叶绿素a吸收峰的吸光度值的5％，否则应重新过滤。假定样品在663nm处的吸光度值为0.03，则在750nm处的吸光度值不得大于0.0015，对试液的清澈程度要求很高，测量710nm或750nm的目的是避免悬浮物质的干扰，一般测量水中的浑浊度所采用的波长为680nm，为避免在680nm处仍有叶绿素a产生的吸收值，故将测量浑浊度的波长选在710nm以上。在计算公式中，凡参与计算的各吸光度值都应减去710nm处的吸光度值，以扣除悬浮物质的干扰。
采用分光光度法测定叶绿素含量，对测量仪器分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm，则叶绿素a的测定误差为2％，叶绿素b为19％，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素a和b来校正。