1kb dna ladder条带跑不开是什么原因
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解决时间 2021-04-12 19:51
- 提问者网友:ミ烙印ゝ
- 2021-04-12 15:04
1kb dna ladder条带跑不开是什么原因
最佳答案
- 五星知识达人网友:佘樂
- 2021-04-12 15:22
建议你把电泳图片贴上,便于分析。
1.5%浓度太高了。1%试试。电泳槽不同,跑相同时间DNA运动距离也不同。说时间不准确,你说你的dna跑了多少厘米吧。太近了就会分不开。况且150v跑1.5%胶电压太小。电压大了又怕琼脂糖化了,DNA扩散也严重,带会粗。所以建议:
首先去别的实验室让他们按他们的条件给你跑一下,看看效果如何。可以把他们的条件copy过来试试。如果想自己摸索,你可以:
1 把胶浓度调至1%,溴酚蓝跑到一半以上基本就可以分开了。
2 如果还不行,把胶调至0.7%。
3 还是不行就到一块长胶,延长电泳时间
4 如果还不行,那就是你购买的MARKER问题,有可能切割得不好,有可能PCR扩增非特异条带多,有可能提纯不好。建议换一个公司的marker再试试。
TAE应该没问题。如果缓冲液有问题,那么不会出现任何一条成型的条带,都是歪歪扭扭或者模糊的。既然前面有几条带清晰就不是缓冲液的问题。实在不行重新配置一下缓冲液。新缓冲液,新胶,应该没问题。
1.5%浓度太高了。1%试试。电泳槽不同,跑相同时间DNA运动距离也不同。说时间不准确,你说你的dna跑了多少厘米吧。太近了就会分不开。况且150v跑1.5%胶电压太小。电压大了又怕琼脂糖化了,DNA扩散也严重,带会粗。所以建议:
首先去别的实验室让他们按他们的条件给你跑一下,看看效果如何。可以把他们的条件copy过来试试。如果想自己摸索,你可以:
1 把胶浓度调至1%,溴酚蓝跑到一半以上基本就可以分开了。
2 如果还不行,把胶调至0.7%。
3 还是不行就到一块长胶,延长电泳时间
4 如果还不行,那就是你购买的MARKER问题,有可能切割得不好,有可能PCR扩增非特异条带多,有可能提纯不好。建议换一个公司的marker再试试。
TAE应该没问题。如果缓冲液有问题,那么不会出现任何一条成型的条带,都是歪歪扭扭或者模糊的。既然前面有几条带清晰就不是缓冲液的问题。实在不行重新配置一下缓冲液。新缓冲液,新胶,应该没问题。
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- 1楼网友:梦中风几里
- 2021-04-12 17:17
时间太短了吧,浓度太高了吧
- 2楼网友:三千妖杀
- 2021-04-12 17:11
电压高了,胶融化了?我以前碰到过这种情况
- 3楼网友:毛毛
- 2021-04-12 16:34
没分开就说明电泳条件不对,marker都跑不开别说目的条带了。
建议电泳条件做以下调整:
1、电压调高,但要防止电泳温度过高导致电泳条带热运动扩散;
2、时间延长;建议首选采纳
3、琼脂糖浓度降低。
建议电泳条件做以下调整:
1、电压调高,但要防止电泳温度过高导致电泳条带热运动扩散;
2、时间延长;建议首选采纳
3、琼脂糖浓度降低。
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