质粒作为基因工程中的运载体必须要有2个以上的限制酶的切点吗？

质粒作为基因工程中的运载体必须要有2个以上的限制酶的切点吗？

做为具有使用性的载体，一般最少有2个以上不同的限制性酶切位点，这样能够保证需要插入片段的效率和插入的片段插入的方向性。如果只有一个酶切位点，那在做连接反应时候载体自连现象会非常严重，同时插入片段有可能以2种相反方向插入载体，这样连接成功后还需要筛选方向正确的连接体，这样筛选过于困难，没有实用性。

作为运载体必须具有四个条件：①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制；②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入；③ 含有复制起始位点，能够独立复制；④有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
上面大哥说的很有道理。