Western blot转膜后marker很漂亮，丽春红s染色没有条带，做下去内参量很少

最近在做Western，我的目的分子是20KD,内参是40KD的β-actin，Marker用的是pierce，胶用的是国内的预制胶8-16%的梯度胶，转膜是湿转，4度300mA恒流2h30min，NC膜，转膜完成后Marker很漂亮10条全出来了，但是用碧云天的丽春红染色后看不到蛋白条带或者很浅，之后β-actin 30ug条带很细，7.5ug基本就没有条带了。转膜后胶上无任何条带，膜上MARKER前后都能看见。蛋白提取是碧云天的RIPA（强），求高手解答。

300mA电流过大，产热很厉害的，蛋白容易降解，建议用低电流转时间长一点。

上样蛋白量太少吧 再看看别人怎么说的。