土壤脱氢酶的测定详细方案

土壤脱氢酶的测定详细方案

土壤脱氢酶活性测定

原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲臢（TPF），TPF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。

测定步骤
1 称取4克鲜土于50ml三角瓶中，加入4mL（TTC-葡萄糖-Tris缓冲溶液（pH7.6，即2ml 1%TTC-Tris缓冲溶液，2ml 1%葡萄糖)，置37℃暗室培养24hr。
2 取出后用少量甲醇提取后过滤，再用50ml容量瓶或比色管定容。
3 滤液马上用485nm波长下分光光度计测定。

附：pH7.6 Tris缓冲液的配制：
A：0.2M 三-（羟甲基）-氨基甲烷溶液（1000 ml含24.23克）
B：0.2M HCl
100 ml A+76.8ml B,加水稀释至400 ml，准确调节pH为7.6。

TPF标准曲线的制备：准确称取10mg TPF溶于250 ml甲醇中，得到40 mg/L的母液。从中吸取0，1，2，3，4，5 ml于50ml容量瓶中，用甲醇定容，得到0，40，80，120，160，200ug TPF的标准曲线。

参考文献
Casida LC Jr, Klein DA, Santoro T(1964) Soil dehydrogenase activity. Soil Science 98, 371-376.
H.Y.Chu, J.G.Zhu, Z.B.Xie, H.Y.Zhang, Z.H.Cao and Z.G.Li(2003) Effects of lanthanum on dehydrogenase activity and carbon dioxide evolution in a Haplic Acrisol. Australian Journal of Soil Research 41, 731-739.
H.Y.Chu,