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DNA限制酶切和琼脂糖凝胶电泳中常说的Marker是什么?还有Loading Dye 在实验中起到什么作用?

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解决时间 2021-02-19 04:06
DNA限制酶切和琼脂糖凝胶电泳中常说的Marker是什么?还有Loading Dye 在实验中起到什么作用?
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1. marker是分子量标准 你要知道电泳时 分子量越小的跑得越快 这样的你的酶切产物电泳后形成的条带 就可以对照marker知道是多大分子量的了
2. loading dye 一般用溴酚蓝或二甲苯青 和混在上样缓冲液里 和 样品一起点到点样孔中,电泳过程中 dye也会往前移动。在特定浓度的凝胶里 dye的迁移率会和特定的分子量dna速度一样。目的是为了知道电泳跑到什么时候可以停止,起指示作用的。 否则一大块胶 没有指示dye,你也不知道改跑到什么时候 还得跑跑就得紫外照照
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呃,简单地说,质粒dna酶切是因为我们之前在质粒上插入了一些目的片段,将质粒转到细菌里,细菌繁殖,再抽繁殖后的细菌里的质粒,就可以得到大量的含有目的片段的质粒,但我们要的是目的片段,质粒上的其他东西要去掉才行,所以要酶切,把我们要的片段切下来,可是切后目的片段与质粒其他片段混在一起,就要电泳把它们分开,把目的片段条带处的胶切下来,纯化,就珐孩粹绞诔悸达溪惮娄得到大量的目的片段了。当然,也可以用此方法判断你的目的片段是不是正确插入质粒了。 不知道你具体想干什么,不过感觉你的目的是鉴定成纤维细胞dna中某一基因的表达情况,那就和酶切无关了,至少和我上面说的那种酶切无关。 good luck~~~~~
DNA的限制性酶切 限制性内切酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上,并在此处切割双链DNA。 loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液,6*的缓冲液中可以显示两条带,前面的蓝色的条带是溴酚蓝,代表的片段大小是 300bp,后面的有点绿色的条带是二甲苯青,代表的片段大小在4000bp左右。   loading buffer的功能主要有两个。第一,里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳;第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。细胞裂解后的裂解液,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解。 loading dye 是跑琼脂糖凝胶用来染DNA的染料,它是和loading buffer按一定的比例混合而成的.有的进口试剂buffer里已经加了loading dye的,就不用加了.试剂说明书都有说明的. .琼脂糖凝胶电泳marker是用来做参考的,类似于标尺的作用。 marker会跑出很多条带,对应带的片段长度是一定的(不
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