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解决时间 2021-03-10 10:03
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显微镜基本光原理 \x0d \x0d ()折射折射率 \x0d \x0d 光线均匀各向同性介质,两点间直线传播,通同密度介质透明物体,则发折射现象,由于光同介质传播速度同造.与透明物面垂直光线由空气射入透明物体(玻璃),光线其介面改变向,并线构折射角. \x0d \x0d (二)透镜性能 \x0d \x0d 透镜组显微镜光系统基本光元件,物镜目镜及聚光镜等部件均由单透镜组.依其外形同,凸透镜(透镜)凹透镜(负透镜)两类. \x0d \x0d 束平行于光轴光线通凸透镜相交于点,点称"焦点",通交点并垂直光轴平面,称"焦平面".焦点两,物空间焦点,称"物焦点",该处焦平面,称"物焦平面";反,象空间焦点,称"象焦点",该处焦平面,称"象焦平面". \x0d \x0d 光线通凹透镜,立虚像,凸透镜则立实像.实像屏幕显现,虚像能. \x0d \x0d (三)凸透镜五种象规律 \x0d \x0d 1.物体位于透镜物二倍焦距外,则象二倍焦距内、焦点外形缩倒立实象; \x0d \x0d 2.物体位于透镜物二倍焦距,则象二倍焦距形同倒立实象; \x0d \x0d 3.物体位于透镜物二倍焦距内,焦点外,则象二倍焦距外形放倒立实象; \x0d \x0d 4.物体位于透镜物焦点,则象能象; \x0d \x0d 5.物体位于透镜物焦点内,则象象形,透镜物同侧比物体远位置形放直立虚象. \x0d 三、光显微镜象(几何象)原理 \x0d \x0d 物体眼张角于某值,肉眼才能区别其各细部,该量称目视辨率ε.佳条件,即物体照度50~70lx及其比度较,达1’.易于观测,般该量加2’,并取平均目镜辨率. \x0d \x0d 物体视角与该物体度尺寸物体至眼睛距离关.公式y=Lε \x0d \x0d 距离L能取,眼睛调节能力定限度,尤其眼睛接近调节能力极限范围工作,使视力极度疲劳.于标准(视)言,佳视距规定250mm(明视距离).意味着,没仪器条件,目视辨率ε=2’眼睛,能清楚区0.15mm物体细节. \x0d \x0d 观测视角于1’物体,必须使用放仪器.放镜显微镜用于观测放置观测员近处应予放物体. \x0d \x0d ()放镜像原理 \x0d \x0d 表面曲面玻璃或其透明材料制光透镜使物体放像,光路图图1所示.位于物焦点F内物AB,其y,放镜y’虚像A’B’. \x0d \x0d 放镜放率 \x0d \x0d Γ=250/f’ \x0d \x0d 式250--明视距离,单位mm \x0d \x0d f’--放镜焦距,单位mm \x0d \x0d 该放率指250mm距离内用放镜观察物体像视角同没放镜观察物体视角比值. \x0d \x0d (二)显微镜像原理 \x0d \x0d 显微镜放镜起着同作用,近处微物体放像,供眼观察.显微镜比放镜具更高放率已. \x0d \x0d 图2物体显微镜像原理图.图便计,物镜L1目镜L2均单块透镜表示.物体AB位于物镜前,离物镜距离于物镜焦距,于两倍物镜焦距.所,经物镜,必形倒立放实像A’B’.A’B’位于目镜物焦点F2,或者*近F2位置.再经目镜放虚像A’’B’’供眼睛观察.虚像A’’B’’位置取决于F2A’B’间距离,限远处(A’B’位于F2),观察者明视距离处(A’B’图焦点F2右边).目镜作用与放镜.所同眼睛通目镜所看物体本身,物体物镜所已经放像. \x0d \x0d (三)显微镜重要光技术参数 \x0d \x0d 镜检,总希望能清晰明亮理想图象,需要显微镜各项光技术参数达定标准,并且要求使用,必须根据镜检目实际情况协调各参数关系.,才能充发挥显微镜应性能,满意镜检效. \x0d \x0d 显微镜光技术参数包括:数值孔径、辨率、放率、焦深、视场宽度、覆盖差、工作距离等等.些参数并都越高越,间相互联系相互制约,使用,应根据镜检目实际情况协调参数间关系,应保证辨率准. \x0d \x0d 1.数值孔径 \x0d \x0d 数值孔径简写NA,数值孔径物镜聚光镜主要技术参数,判断两者(尤其物镜言)性能高低重要标志.其数值,别标刻物镜聚光镜外壳. \x0d \x0d 数值孔径(NA)物镜前透镜与检物体间介质折射率(n)孔径角(u)半数弦乘积.用公式表示:NA=nsinu/2 \x0d \x0d 孔径角称"镜口角",物镜光轴物体点与物镜前透镜效直径所形角度.孔径角越,进入物镜光通亮越,与物镜效直径比,与焦点距离反比. \x0d \x0d 显微镜观察,若想增NA值,孔径角增,唯办增介质折射率n值.基于原理,产水浸物镜油浸物镜,介质折射率n值于1,NA值能于1. \x0d \x0d 数值孔径值1.4,数值理论技术都达极限.目前,用折射率高溴萘作介质,溴萘折射率1.66,所NA值于1.4. \x0d \x0d 必须指,充发挥物镜数值孔径作用,观察,聚光镜NA值应等于或略于物镜NA值. \x0d \x0d 数值孔径与其技术参数着密切关系,几乎决定影响着其各项技术参数.与辨率比,与放率比,与焦深反比,NA值增,视场宽度与工作距离都相应变. \x0d \x0d 2.辨率 \x0d \x0d 显微镜辨率指能显微镜清晰区两物点间距,称"鉴别率".其计算公式σ=λ/NA \x0d \x0d 式σ辨距离;λ光线波;NA物镜数值孔径.见物镜辨率由物镜NA值与照明光源波两素决定.NA值越,照明光线波越短,则σ值越,辨率越高. \x0d \x0d 要提高辨率,即减σ值,采取措施 \x0d \x0d (1)降低波λ值,使用短波光源. \x0d \x0d (2)增介质n值提高NA值(NA=nsinu/2). \x0d \x0d (3)增孔径角u值提高NA值. \x0d \x0d (4)增加明暗反差. \x0d \x0d 3.放率效放率 \x0d \x0d 由于经物镜目镜两放,所显微镜总放率Γ应该物镜放率β目镜放率Γ1乘积: \x0d \x0d Γ=βΓ1 \x0d \x0d 显,放镜相比,显微镜具高放率,并且通调换同放率物镜目镜,能够便改变显微镜放率. \x0d \x0d 放率显微镜重要参数,能盲目相信放率越高越.显微镜放倍率极限即效放倍率. \x0d \x0d 辨率放倍率两同互联系概念.关系式:500NA<Γ<1000NA \x0d \x0d 选用物镜数值孔径够,即辨率够高,显微镜能清物体微细结构,即使度增放倍率,能轮廓虽细节清图像,称效放倍率.反辨率已满足要求放倍率足,则显微镜虽已具备辨能力,图像太仍能眼清晰视见.所充发挥显微镜辨能力,应使数值孔径与显微镜总放倍率合理匹配. \x0d \x0d 4.焦深 \x0d \x0d 焦深焦点深度简称,即使用显微镜,焦点准某物体,仅位于该点平面各点都看清楚,且平面定厚度内,能看清楚,清楚部厚度焦深.焦深,看检物体全层,焦深,则能看检物体薄层,焦深与其技术参数关系: \x0d \x0d (1)焦深与总放倍数及物镜数值孔径反比. \x0d \x0d (2)焦深,辨率降低. \x0d \x0d 由于低倍物镜景深较,所低倍物镜照相造困难.显微照相详细介绍. \x0d \x0d 5.视场直径(FieldOfView) \x0d \x0d 观察显微镜,所看明亮圆形范围叫视场,由目镜视场光阑决定. \x0d \x0d 视场直径称视场宽度,指显微镜看圆形视场内所能容纳检物体实际范围.视场直径愈,愈便于观察. \x0d \x0d 公式F=FN/β \x0d \x0d 式F:视场直径,FN:视场数(FieldNumber,简写FN,标刻目镜镜筒外侧),β:物镜放率. \x0d \x0d 由公式看: \x0d \x0d (1)视场直径与视场数比. \x0d \x0d (2)增物镜倍数,则视场直径减.,若低倍镜看检物体全貌,换高倍物镜,能看检物体部份. \x0d \x0d 6.覆盖差 \x0d \x0d 显微镜光系统包括盖玻片内.由于盖玻片厚度标准,光线盖玻片进入空气产折射光路发改变,产相差,覆盖差.覆盖差产影响显微镜响质量. \x0d \x0d 际规定,盖玻片标准厚度0.17mm,许范围0.16-0.18mm,物镜制造已厚度范围相差计算内.物镜外壳标0.17,即表明该物镜所要求盖玻片厚度. \x0d \x0d 7.工作距离WD \x0d \x0d 工作距离叫物距,即指物镜前透镜表面检物体间距离.镜检,检物体应处物镜倍至二倍焦距间.,与焦距两概念,平习惯所说调焦,实际调节工作距离. \x0d \x0d 物镜数值孔径定情况,工作距离短孔径角则. \x0d \x0d 数值孔径高倍物镜,其工作距离. \x0d \x0d (四)物镜 \x0d \x0d 物镜显微镜重要光部件,利用光线使检物体第象,直接关系影响象质量各项光技术参数,衡量台显微镜质量首要标准. \x0d \x0d 物镜结构复杂,制作精密,由于象差校,金属物镜筒内由相隔定距离并固定透镜组组合.物镜许具体要求,合轴,齐焦. \x0d \x0d 齐焦既镜检,用某倍率物镜观察图象清晰,转换另倍率物镜,其象亦应基本清晰,且象偏离应该定范围内,合轴程度.齐焦性能优劣合轴程度高低显微镜质量重要标志,与物镜本身质量物镜转换器精度关. \x0d \x0d 现代显微物镜已达高度完善,其数值孔径已接近极限,视场辨率与理论值区别已微乎其微.继续增显微物镜视场与提高视场边缘象质量能性仍存,种研究工作,至今仍进行. \x0d \x0d 显微物镜与目镜参于象点区别.物镜显微镜复杂重要部,宽光束工作(孔径),些光束与光轴倾角较(视场);目镜窄光束工作,其倾角(视场).计算物镜与目镜,消除象差差别. \x0d \x0d 与宽光束关象差球差、慧差及位置色差;与视场关象差象散、场曲、畸变及倍率包差. \x0d \x0d 显微物镜消球差系统.意味着:轴共轭点言,消除球差并且实现弦条件,每物镜仅两种消球差点.,物体与象计算位置任何改变均导致象差变. \x0d \x0d 1.物镜主要参数 \x0d \x0d (1)放率β \x0d \x0d (2)数值孔径NA \x0d \x0d (3)机械筒L:显微镜,物镜支承面目镜支承面间距离称机械筒.于台显微镜说,机械筒固定.我规定机械筒160毫米. \x0d \x0d (4)盖玻片厚度d \x0d \x0d (5)工作距离WD \x0d \x0d 些参数,刻物镜筒,图3所示. \x0d \x0d 种所谓筒限显微物镜,种物镜般带辅助物镜(叫补偿物镜或镜筒物镜),观察物体位于物镜前焦点,经物镜,像限远,再经辅助物镜像辅助物镜焦平面,图4所示.物镜辅助物镜间平行光,所间距离比较自由些,加入棱镜等光元件. \x0d \x0d 2.物镜基本类型 \x0d \x0d (1)按显微镜镜筒度(mm计):透射光用160镜筒,带0.17mm厚或更厚盖玻片;反射光用190镜筒,带盖玻片;透射光与反射光用镜筒,筒限. \x0d \x0d (2)按浸特征:非浸式(干式)、浸式(油浸、水浸、甘油浸及其浸). \x0d \x0d (3)按光装置:透射式、反射式及折反射式. \x0d \x0d (4)按数值孔径放倍数:低倍(NA≤0.2与β≤10X),倍(NA≤0.65与β≤40X),高倍(NA>0.65与β>40X). \x0d \x0d (5)按校象差情况同,通消色差物镜,半复消色差物镜,复消色差物镜,平视场消色差物镜,平视场复消色差物镜单色物镜. \x0d \x0d a.消色差物镜(Achromaticobjective) \x0d \x0d 应用广泛类显微物镜,外壳"Ach"字.校轴点位置色差(红,蓝二色)、球差(黄绿光)弦差,保持齐明条件.轴外点象散超允许值(-4属光度),二级光谱未校. \x0d \x0d 数值孔径0.1~0.15低倍消色差物镜般由两片透镜胶合起双胶物镜构.数值孔径至0.2消色差物镜由两组双胶透镜构.数值孔径增0.3,再加入平凸透镜,该平凸透镜决定着物镜焦距,其透镜则补偿由其平面与球面产象差.高倍物镜平面象差用浸消除.高倍消色差物镜般均浸式,由四部构:前片透镜、新月形透镜及两双胶透镜组. \x0d \x0d b.复消色差物镜(Apochromaticobjective) \x0d \x0d 类物镜结构复杂,透镜采用特种玻璃或萤石等材料制作,物镜外壳标"Apo"字.两色光实现弦条件,要求严格校轴点位置色差(红,蓝二色)、球差(红,蓝二色)弦差,同要求校二级光谱(再校绿光位置色差).其倍率色差并能完全校,般须用目镜补偿. \x0d \x0d 由于各种象差校极完善,比响应倍率消色差物镜更数值孔径,仅辨率高,象质量优且更高效放率.,复消色差物镜性能高,适用于高级研究镜检显微照相. \x0d \x0d c.半复消色差物镜(Semiapochromaticobjective) \x0d \x0d 半复消色差物镜称氟石物镜,物镜外壳标"FL"字.结构透镜数目比消色差物镜,比复消色差物镜少,象质量,远较消色差物镜,接近于复消色差物镜. \x0d \x0d d.平视场物镜(Planobjective) \x0d \x0d 平场物镜物镜透镜系统增加快半月形厚透镜,达校场曲缺陷,提高视场边缘像质量目.平场物镜视场平坦,更适用于镜检显微照相.于平视场消色差物镜,其倍率色差,必用特殊目镜补偿.平视场复消色差物镜,则必须用目镜补偿倍率色差. \x0d \x0d e.单色物镜 \x0d \x0d 类物镜由石英、荧石或氟化锂制组单片透镜构.能紫外线光谱区别区内使用(宽度超20mm),见光谱区能采用单色物镜.类物镜均制反射式与折反射式系统.主要缺点相部光束遮蔽(入瞳面积25%).新型折反射系统,由于采用半透明反射镜及物镜胶合结构,使缺点减轻,取消反射镜框遮光.并且两同轴反射镜残余象差互相补偿,同用透镜组增数值孔径.若系统校满意,孔径达NA=1.4,遮蔽超入瞳面积4%. \x0d \x0d f.特种物镜 \x0d \x0d 所谓"特种物镜"述物镜基础,专门达某些特定观察效设计制造.主要几种: \x0d \x0d (a)带校环物镜(Correctioncollarobjective) \x0d \x0d 物镜部装环装调节环,转调节环,调节物镜内透镜组间距离,校由盖玻片厚度标准引起覆盖差.调节环刻度0.11--.023,物镜外壳标科数字,表明校盖玻片0.11-0.23mm厚度间误差.
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