PCR-RFLP检测基因多态性的机理和主要实验步骤?

基因多态性的产生原因是一个也可以是多个核酸序列有所差异,而不产生显性的生物结果．
造成的对于实验原理的影响是,该差异通常造成产生一个酶切位点的特性,而无差异则不具有,也可以是原来有,差异后消失．总之可以利用酶切来判断有无这种差异．
PCR的作用主要是扩充酶切原料,所以PCR的引物设计在你下一步要切割的两侧即可,PCR通常的高效扩充大约是复制100-500个BP的产物,当然随着现代技术的提高,也没有必要强行复合这个原则．
另外,由于将来切完了要电泳看,所以最好设计的时候切的位置不在中心．当然这点我觉得不是那么重要了．
PCR完跑跑电泳试试,能清晰看到就好．
然后就内切酶来切,注意避免incomplete digest,就是最好切的时间充足BUFFER浓度要正确．
切完了跑,能看出不同的,就是有差异．
举例,原本含有GGACCC,有差异的是GGGCCC,那么原本的不能被APAI 切,有差异的能．
PCR复制,不管是啥,把这段争议的包含在里面,然后APAI切了跑．比如说复制500BP,切了以后理论是200+300
如果完全不切,只见500,那就是没差异序列存在．
如果既有500,也有200 +300,那么就可能是一个序列有,另外一个无．当然,也可能是酶切不彻底,要避免．
如果只有200+300,那么就是两个序列都有．
最后基本上定论还是需要SEQUENCING来定． RFLP常常是用来SCREENING一下．