SOD单位活力怎么计算

SOD单位活力怎么计算

以检测血液中SOD的活性为例：
1．取小鼠新鲜血液500 微升置于4mL 生理盐水中, 混匀, 1500 r/m in 离心5m in, 弃上清液, 将沉淀用生理盐水洗涤3 次, 弃去上清液, 加入2 mL 双蒸水, 搅拌, 然后依次再加入冷乙醇1 mL , 氯仿1 mL , 4000 r/m in 离心15 m in,
弃沉淀, 上清液即为红细胞(RBC) SOD 抽提液, 供测SOD 活性使用.
2． 连苯三酚自氧化速率的测定. 　在3 cm 光径比色皿中加入9 mL 50mmol/L , pH 8. 2 Tris HCL 缓冲液后, 放入721 分光光度计, 于420 nm 处调OD 值为0 作为对照后, 加入适量100mmol/L 连苯三酚溶液搅匀, 以加入时为零点, 每隔30 s 测OD 值一次, 要求自氧化速率控制在0.070 OD/m in 左右.
3． 红细胞SOD 抽提液的活力测定. 　首先测连苯三酚的自氧化速率, 而后向
Tris-HCL 缓冲液中加样, 同时适当减少缓冲液, 使反应总体积保持为9 mL , 其余操作不变, 记录OD 值, 计算加入红细胞SOD 抽提液后的自氧化速率.
4． SOD 标准品活性的测定. 　盛有SOD 标准品冻干粉的安瓿瓶打开后, 注入1 mL 双蒸水, 充分溶解, 用微量进样器取适量, 稀释后, 作为待测样, 加入相应体积的T ris2HCL 缓冲液使总体积为9 mL ,测定同上.
5． 酶活性的计算公式.
单位体积活性(u·mL - 1) = （原自氧化速率- 加样后速率）/
（原自氧化速率×0. 5） × 1/（加样量(mL ) ×反应液总体积(mL ) ×样液稀释倍数
式中, 每毫升反应液中, 每分钟抑制连苯三酚自氧化速率50% 的酶量为一个酶活性单位.