非预染蛋白MAKER和预染蛋白MARKER有什么区别
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解决时间 2021-03-19 06:11
- 提问者网友:锁深秋
- 2021-03-18 17:52
非预染蛋白MAKER和预染蛋白MARKER有什么区别
最佳答案
- 五星知识达人网友:爱难随人意
- 2021-03-18 18:10
,那个用水溶解后也需要加loading buffer沸水浴处理的。不过现在卖的很多都是那种直接点样的。说明书一般都有说的,一般10微升。
loading buffer就是上样缓冲液的英文。
另外,你的实验步骤里面,你打错了,第三步是10000rpm*2min,我非常肯定这个步骤一定是高速离心。
第一个步骤,我们一般取1ml菌液离心10000rpm*5min吧,具体记得不太清楚了。然后加loading buffer好像是120微升,1倍的,100微升也OK啦,然后沸水浴5到10分钟,然后高速离心,点样。为了避免串样,维持各点样孔之间的那种压力吧,具体怎么说我记不清楚了,反正就是防止别的孔的样品跑到空白泳道,很难看的。所以在空白处也点上1倍的loading buffer
你按照一个固定的数字做下来,点样的时候开始要摸索一下,多点几个样,看看点多少微升合适,因为你的菌液浓度什么的我们也不知道。你要有条件,可以给蛋白定量,因为跑电泳蛋白浓度过高会很难看,浓度低了看不清楚。
loading buffer就是上样缓冲液的英文。
另外,你的实验步骤里面,你打错了,第三步是10000rpm*2min,我非常肯定这个步骤一定是高速离心。
第一个步骤,我们一般取1ml菌液离心10000rpm*5min吧,具体记得不太清楚了。然后加loading buffer好像是120微升,1倍的,100微升也OK啦,然后沸水浴5到10分钟,然后高速离心,点样。为了避免串样,维持各点样孔之间的那种压力吧,具体怎么说我记不清楚了,反正就是防止别的孔的样品跑到空白泳道,很难看的。所以在空白处也点上1倍的loading buffer
你按照一个固定的数字做下来,点样的时候开始要摸索一下,多点几个样,看看点多少微升合适,因为你的菌液浓度什么的我们也不知道。你要有条件,可以给蛋白定量,因为跑电泳蛋白浓度过高会很难看,浓度低了看不清楚。
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- 1楼网友:神也偏爱
- 2021-03-18 18:45
简单讲,就是非预染蛋白maker电泳时看不到条带,染色后才能看到,而预染蛋白marker会有特定的某些蛋白条带带有颜色,电泳过程中可以观察到,还有在wb过程中也起到转膜是否成功的指示作用
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