微卫星PCR有关模板、引物、反应条件

用微卫星检测种群多样性时，pcr反应中的模板是所有个体的混合吗，还是，一个个体模板加所有的微卫星引物？
因为很多对微卫星引物，那么在做pcr时，多对引物是同时加入？还是先加一对引物，在用这对引物做完PCR的时候，在pcr产物的基础上再加入第二对引物，依次类推？
pcr时的退火温度是针对很多的微卫星引物设置退火梯度还是怎么的？
还有就是在检测时只能用8%非变性聚丙烯酰胺吗？染色可以用EB 吗

现在做str建议用单标荧光引物，如果大小重复那么可以使用多个荧光标记来区分，接下来说说你的问题

首先，如果你的引物不存在相互的干扰，那么你可以试着放在一个体系里面做实验。
其次，引物设计按照标准的方法就可以
最后，实在是要用电泳的方法，并且你的片段大小相差较大的情况下可以使用琼脂糖，什么情况下用聚丙烯酰胺凝胶，这个我就不知道了。DNA染色是可以用EB的。

其实最好还是用荧光引物，再用3730测序仪的片段分析功能来分析。现在很多公司都做STR检测和分析的

有问题请回复，我知道的可以告诉你，不知道的就。。。。。