为何PCR产物什么都没有急

为何PCR产物什么都没有急

引物特异性好吗?如果引物特异性好的话,那就是你的退火温度的问题,你可以把引物合成公司提供的引物的Tm值的上下15度范围之内都摸一遍,当然前提是RNA的质量一定要高,如果还不出的话,那么就应该高度怀疑引物的问题,建议你还是重新更换引物.
1、RT试剂盒的问题，建议你作内参，鉴定你的模板。
2、把退火温度降到最低，先出带，有杂带再提高。
3、作一管阴性对照，证明不是引物降解，如果降解有类似的拖带。
4、PCR试剂盒没有问题，建议问问同时作的同事
5、循环次数加到最大，40－45次之间。
6、延伸时间加大。