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凝胶装柱的问题

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解决时间 2021-02-26 09:14
现在要准备装柱了,可是只是看产品的说明书有点太模糊了!
有哪个大侠能给我仔细地讲一下怎么装柱,我的凝胶是CH-Sephrose 4B偶联Procainamide的凝胶!
请从凝胶的溶胀处理开始!
谢谢!
最佳答案
一种凝胶柱装柱新方法,是将凝胶浆加热煮沸,并通过改进的细长移液管在液面下将凝胶浆沿凝胶管内壁均匀旋转转移到凝胶管内,来制备凝胶柱。本发明通过煮沸排气和在液面下转移凝胶浆,不仅可完全除去气泡,还兼顾了溶胀和消毒,特别是用改进的细长移液管将凝胶浆沿凝胶管内壁均匀旋转转移到凝胶管内,使得凝胶浆表面平整,避免出现凹凸不平的现象。本方法不仅简单、省时、方便、无需特殊设备,而且装柱成功率达到100%。
全部回答
装柱前要将色谱柱垂直固定在支架上。因为干的凝胶和用缓冲液平衡好的凝胶的体积差别很大,因此装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。实验一般使用的是交联葡聚糖凝胶 (sephadex g-75)。“g”表示凝胶的交联程度,膨胀程度及分离范围,75表示凝胶得水值,即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g。凝胶用蒸馏水充分溶胀后,配成凝胶悬浮液,在与色谱柱下端连接的尼龙管打开的情况下,一次性缓慢倒入色谱柱内,装填时可轻轻敲动色谱柱,使凝胶装填均匀。注意色谱柱内不能有气泡存在,一旦发现有气泡,必须重装。装填完后,立即连接缓冲液洗脱瓶,在约50 cm高的操作压下,用300 ml的物质的量浓度为20 mmol/l的磷酸缓冲液(ph为7.0)充分洗涤平衡凝胶12 h,使凝胶装填紧密。
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