以前没有学过分子生物学 希望能用通俗的话解释 还有想问下1 pcr有什么应用
2从提取rna 到cDNA 在进行pcr 之后还能进行什么 3我所测得基因序列是未知的,是不是在设计引物时只能找亲缘相近的 那我pcr之后得到的基因序列 又不能确定是不是我想要的 这又该怎么办呢? 谢谢了
如何用pcr测未知基因的序列
答案:2 悬赏:30 手机版
解决时间 2021-03-06 16:34
- 提问者网友:不爱我么
- 2021-03-06 05:46
最佳答案
- 五星知识达人网友:时间的尘埃
- 2021-03-06 06:24
PCR是用来扩增目的片段的,可以富集你想要的片段然后用来测序或者克隆基因,可以在这个片段上做点突变,甚至可以用来测定目的片段在原始模版当中的丰度(包括有无)。
cDNA除了进行PCR,也可以用来做cDNA文库
第三个问题完全听不懂,不知道你的基因未知到什么程度,如果你完全不知道他的序列,你怎么确定他是一个什么基因,跟什么比较接近,又怎么设计引物呢,不清楚你要的是个什么标准。测序的话都是用TA克隆将PCR产物克隆到质粒上,拿单克隆去测的。这样测序不需要特异性引物。
cDNA除了进行PCR,也可以用来做cDNA文库
第三个问题完全听不懂,不知道你的基因未知到什么程度,如果你完全不知道他的序列,你怎么确定他是一个什么基因,跟什么比较接近,又怎么设计引物呢,不清楚你要的是个什么标准。测序的话都是用TA克隆将PCR产物克隆到质粒上,拿单克隆去测的。这样测序不需要特异性引物。
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- 1楼网友:纵马山川剑自提
- 2021-03-06 07:47
提取细胞总rna然后用试剂盒反转录成cdna,用cdna作为模板扩增基因的cds区,然后想要转染进细胞中。比如myod1基因,首先在ncbi找到它的mrna序列,然后找到它的cds序列,全部复制下来,在primer 5.0 中。正向引物直接从cds的第一个核酸开始(比如18bp),反向引物从cds最后一个核酸开始,向前选择序列(比如17bp),调节2个引物的长度(不一定要一致),尽量避免错配,二聚体,产生错的产物即可。最后在引物的5‘端添加酶切位点以及保护碱基。
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