成纤维细胞原代培养,鸡胚细胞怎样制备

成纤维细胞原代培养,鸡胚细胞怎样制备

A、材 料
a、1 0 －1 3 龄 S P F鸡胚。
b、D ME M原粉购自美国 G I B C O公司，按说明书添加双蒸水、N a H C O ， ， 调 p H值至 7 ． 2， 正压滤过除菌， 4 ~ C 保存 。使用前添加 1 0 ％（灭活）胎牛牛血清、 1 ％广普抗生素。
c、Ha n k s 液 用前调pH值至 7.2—7.6,4℃保存。
d、0.125－0.25％胰蛋白酶消化液。
B、鸡胚成纤维细胞的制备 取 1 0 1 3龄鸡胚 2个 ， 用无菌方法将胚提出放入无菌平皿中，去喙、爪 、 翅和内脏 ， 剪成小块以 H a nk s 液洗 2～3次， 然后以每个鸡胚 1 0 mL的量加入胰蛋白酶消化液， 室温 30 mi n 左右。 消化完毕， 以 8 层灭菌纱布滤过， 将滤液离心去除胰蛋白酶消化液，再用 DMEM细胞培养液将细胞悬起计数分装于细胞培养瓶 中，置 3 7 ~ C 含5％CO2的培养箱中培养 2 4 h 。