PCR 内参 跑胶

我跑半定量PCR的时候,内参出来的亮度不一致,有的 泳道很亮,有的暗一些,那我这张图还可以用吗,因为有人说内参的亮度应该保持一致?不是只要比目的基因和内参的灰度值来比较就可以的吗?

如果按理论算的话，电泳条带亮度的不同代表起始浓度的不同，但是，你要知道，DNA模板浓度达到一定程度之后，PCR产物亮度和起始模板浓度并不是完全成正比的。
如10^7次方的模板和10^8次方的模板PCR的产物电泳亮度可能区别就不是很大，也就是扩增效率会随着模板浓度的变化而变化。
所以我们要尽量使内参的条带亮度一致，以保证模板浓度一致，这样就尽量可以使各个不同模板之间在扩增目的基因时的扩增效率一致。

看看电泳时你的内参样品是不是加的量有些少呢，比如marker加5ul的话，内参尽量加到9ul试试，用10乘的loading buffer刚好。 我不知道你是不是只做了内参没有做你的目的基因？是内参和目的基因都没有条带还是只有内参没条带呢？ 另外不知道你的样品是怎么得到的，如果是提取rna再逆转录的话，有可能rna本身提取时降解，如果那样的话建议跑个rna电泳，看看是不是三条带