长片段PCR 扩不出，可能的原因是什么
答案:1 悬赏:10 手机版
解决时间 2021-03-13 13:28
- 提问者网友：风月客
- 2021-03-12 23:48
长片段PCR 扩不出，可能的原因是什么
最佳答案
- 五星知识达人网友：玩家
- 2021-03-13 00:46
具体是什么现象?是有短片段被扩增出来,还是就彻底没有看到任何条带?
通常如果片段长度很长,扩增失败有可能是因为超出了聚合酶的合成能力.所以也需要看你要扩增的片段,是否在你的扩增酶能力范围之内.如果片段特别长,建议使用长片段扩增酶.
另外,延伸时间是否充分.本来要合长片段就需要延伸时间足够长.建议根据长片段扩增酶的说明书进行PCR条件设定.
当然,最基本的是首先需要确定在样品中有目标片段,很多长片段扩增的时候,是预计有这么长,但实际样品中的情况不同.所以如果有扩增得到短的片段,也建议测序看看,扩增得到的是什么,再判断.
通常如果片段长度很长,扩增失败有可能是因为超出了聚合酶的合成能力.所以也需要看你要扩增的片段,是否在你的扩增酶能力范围之内.如果片段特别长,建议使用长片段扩增酶.
另外,延伸时间是否充分.本来要合长片段就需要延伸时间足够长.建议根据长片段扩增酶的说明书进行PCR条件设定.
当然,最基本的是首先需要确定在样品中有目标片段,很多长片段扩增的时候,是预计有这么长,但实际样品中的情况不同.所以如果有扩增得到短的片段,也建议测序看看,扩增得到的是什么,再判断.
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