Ni柱亲和层析的具体操作？

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解决时间 2021-04-05 21:30

提问者网友：贪了杯
2021-04-05 05:11

Ni柱亲和层析的具体操作？

最佳答案

五星知识达人网友：孤独入客枕
2021-04-05 05:44

Ni柱填料一般有两种，NTA和IDA亲和柱，你这个大小的蛋白1ml填料理想状况可以吸附20mg以上，最多2ml填料不就够了。这种柱子一般不用大体积，一般装柱都是1-2ml填料，我也用过5-10ml填料的，按比例使用同等条件洗脱效果比小体积的柱子要差很多。纯化是纯度和效率的矛盾，你需要什么样的纯度，需要多大量，我对你的实验并不熟悉，只能告诉你，理论上每ml填料可以结合你的蛋白大约20-30mg（质量好的填料），这种量还是比较可观的，做小鼠的动物实验都足够了。
我自己制备1g纯蛋白都是用2ml填料纯化的
国产填料主要是基质合成比较差，如果其基质是进口的，那和进口填料也差不多，就是质量不稳定而已
我不知道你指什么两种，NTA只是一种化学物质－氮川三乙酸，所以我不认为这个填料有什么两种，最多偶联基质和方式不同而已，功能基团是一样的，不一样的功能团就不会叫这个名字，除非你指的是IDA，IDA已经慢慢地被淘汰了，详细的就不多说了

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