氧化应激指标的常用检测方法?

氧化应激指标的常用检测方法?

氧化应激检测
　　用氧化应激指标检测试剂盒（由南京建成生物公司提供），按照说明书操作检测。
　　T-AOC、ROS、SOD、MDA、NO检测
　　用Fe3+还原法测定血浆总抗氧化能力（T-AOC），采用Fenton 反应及Gress 显色原理测定活性氧(ROS)，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(MDA)含量，硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）。

实时定量PCR检测
　　取肝素抗凝新鲜人外周血5 ml，淋巴细胞分离液［密度1 g/cm3(20℃)］分离外周血单个核细胞，加入TRIZOL(Invitrogen公司产品)，抽提总RNA。紫外吸收测定法检测RNA浓度和纯度，A 260
nm/A 280 nm比值在1.8-2.1之间。采用变性琼脂糖凝胶电泳, 紫外透射光下观察并拍照。5 μg总RNA经oligo(dT) 引物逆转录合成cDNA，逆转录反应为37℃ 1小时、95℃ 5分钟，cDNA溶液储存于-20℃备用。由上海康成生物公司合成引物，hOGG1正义引物： 5'-CCCCAGACCAACAAGGAACT-3'； 反义引物： 5'-TGGAACCCTTTCTGCGCTTT-3'，扩增片段145 bp；管家基因正义引物： 5'- CCTGTACGCCAACACAGTGC-3'；反义引物： 5'-ATACTCCTGCTTGCTGATCC-3'，扩增片断211 bp。定量阳性模板扩增曲线以hOGG1模板起始拷贝数的常用对数为横坐标，循环阈值为纵坐标，得到标准曲线，相关系数r=0.99991。荧光定量PCR反应体系25 μl： SybergreenⅠ(Invitrogen公司产品) 终浓度6.25 μl，25 mmol/L MgCl2 溶液3 μl， 20 μmol/L 的PCR特异引物各0.5 μl，Taq聚合酶3 U， dNTP混合液3 μl，cDNA 1 μl。 反应条件(Rotor-Gene3000 Realtime PCR仪): 94℃5分钟，40个循环(94℃ 10秒，58℃ 15秒，72℃ 20秒)。PCR产物与100 bp DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，GoldViewTM染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。hOGG1与β-actin绝对拷贝数之比，作为hOGG1基因的相对表达量

是初几的我给你找找