进行基因测序时，怎么对结果进行分析

进行基因测序时，怎么对结果进行分析

测序过程常见问题分析与解答
1、为什么找不到PCR引物?
答：以下几种情况，将无法找到做PCR时的引物序列
(1)用PCR引物作为测序引物进行测序时，所测序列是从引物3’末端后第一个碱基开始的，所以自

然就找不到您的引物序列了。有两种方法可以得到您的引物序列。对于较短的PCR产物(<800bp)，

可以用另一端的引物进行测序，从另一端测序可以一直测到序列的末端，就可以在序列的末端得到

您的引物的反向互补序列。对于较长的序列，一个测序反应测不到头，因此就只能将您的PCR产物片

段克隆到适当的载体中，用载体上的通用引物进行测序。由于载体上的通用引物与您的插入序列之间

还有一段距离，因此就可以得到您的完整的引物序列。由于在测序的起始端总会有一些碱基无法准确

读出，因此，您如果想得到您的PCR产物的完整序列，最好克隆后进行测序。

(2 PCR产物用T载体克隆后，由于克隆的方向是随机的，因此，当您在一条链上找不到您的引物序列

时，试图在互补链上寻找您的引物序列。
(3)当测序引物离您的插入片段很近时，有时可能也无法找到您的引物的全序列。这主要是因为有时

测序的起始端由于未去除的染料或引物二聚体的干扰，造成起始区的序列不好，可能无法找到您的引

物完整序列。
(4)有时，质粒做模板进行测序时，由于某些原因，质粒上没有插入外援片段，为空载体，所测的序

列完全为载体序列，此时自然也找不到引物序列。
2、DNA测序样品用什么溶液溶解比较好?
答：溶解DNA测序样品时,用灭菌蒸馏水溶解最好。DNA的测序反应也是Taq酶的聚合反应,需要一个最佳的 酶反应条件.如果DNA用缓冲液溶解后,在进行了测序反应时,DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体系条件,造成Taq酶的聚合性能下降。

有人溶解DNA测序样品时使用TE Buffer。的确，TE Buffer能增加DNA样品保存期间的稳定性，

但TE Buffer对DNA测序反应有影响，根据经验，推荐使用灭菌蒸馏水来溶解DNA测序样品。

3、提供DNA测序样品时，提供何种形态的比较好?
答：推荐客户提供菌体，由测序公司来提取质粒，这样DNA样品比较稳定。

如果自己提供DNA样品，我们也很欢迎，但一定要注意样品纯度和数量。

提供的测序样品为PCR产物时，特别需要注意DNA的纯度和数量。PCR产物应该进行切胶回收，否则无法得到良好的测序效果。

有关DNA测序样品的详细情况请严格参照“测序模板的要求”部分的说明。