western 转膜不均匀什么原因

western 转膜不均匀什么原因

七叶禾0916(站内联系TA)忘了讲，是湿转英菲尼迪(站内联系TA)这个可能是两个marker加的不一样 比如是均匀否 这种实验就得多做 做的多了就经验足了piaoyingaza(站内联系TA)湿转影响因素很多，Transfer buffer很关键，配方一定不能出错，温度控制必须搞好，最好是在四度环境下，用碎冰盖得严严实实的，一般来说，110kd的蛋白，100V，1h足矣，再做吧jl860822(站内联系TA)Western的操作比较繁琐，从配制各种溶液到跑胶转膜，出现问题之后可能的影响因素很多，比较难分析，所以从配制溶液开始，每一步都要自己亲自操作，这样容易分析问题的原因blackrose8089(站内联系TA)Transfer buffer是新配的吗？是不是用的次数太多了？孙启亮(站内联系TA)可能是因为你的三明治夹层有气泡，造成局部电阻过大所以没转过去porphybaby(站内联系TA)可能是 三明治 没夹好 松了 然后你的蛋白都飘散到转膜液里去了 如果是这样 你可以用 考马斯亮蓝去染一下转膜后的胶 看看是否一边几乎没有条带 而另一边仍然有较多的条带
如果是左右两边marker不一样 也有可能是 marker的量不一样 导致一边全上去 另一边 还有一些在
这个可能是你上样上不准的原因。

蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即western blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。 蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所（friedrich miescher institute）的harry towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特（neal burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（analytical biochemistry）中首次被称为western blot。蛋白免疫印迹（western blot）是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物nc膜或pvdf膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。