流式检测细胞周期都有哪些染色方法

流式检测细胞周期都有哪些染色方法

从分类上来说，一般有两类：第一类是只染DNA。这类方法比较简单，用酒精固定细胞后，直接加含有RNA酶的荧光染料，比如PI等，然后就可以直接上机。
第二类另外加了一个步骤，在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物，比如BrdU或者EdU。细胞新合成的DNA上就会有这些物质。在不同时间点收集细胞，用DNA染料染DNA的同时，还以用抗体或者化学发光法染核苷酸模拟物也发荧光。这个方法的有点就是不仅可以像第一类方法一样，看到处于细胞周期各个期的百分率，另外还可以看到有多少DNA是新合成的。是一个动态的过程。

流式检测凋亡的方法有很多种，不同的方法适用于不同的细胞类型。目前一个很大的误区就是滥用annexin v +pi来检测各种细胞的凋亡。这个方法是为了检测悬浮细胞，比如白细胞而设计的。贴壁培养，或者直接从组织分离得到的细胞不适合用这个方法检测。因为在处理细胞的时候回造成大量的假阳性。 贴壁细胞可以采用检测caspase活性的方法来反应凋亡，而且方法很简单。目前有caspase底物结合的荧光染料。直接加到细胞培养液里面。细胞摄取后，如果处于凋亡期，细胞内的caspase-3/7激活。，降解了底物，荧光染料释放后进入细胞核，染色dna，这个细胞在流式检测时就是阳性细胞。 这种试剂盒invitrogen出的，有好几种颜色可选