解答题青枯病是马铃薯生产中一种危害严重的细菌性病害。1996年，我国科学家首次在世界上

解答题 青枯病是马铃薯生产中一种危害严重的细菌性病害。1996年，我国科学家首次在世界上获得抗青枯病转基因马铃薯株系，为防治这种毁灭性病害开辟了道路。他们根据存在于昆虫体内的抗菌肽的氨基酸序列，人工设计并合成了几个抗菌肽基因，例如ShivaA,CecropinB等基因，并将其导入马铃薯中，转基因马铃薯获得了青枯病抗性的表型。（1）在克隆基因过程中，通常采用____技术对目的基因进行扩增，下列由一个DNA分子扩增为两个DNA分子过程的叙述中，正确的序号顺序是____。①引物与单链相应互补序列结合②目的基因DNA受热变性后解链为单链 ③DNA聚合酶作用下复制（2）基因工程的第二步是____。一个完整的重组DNA分子的组成除了目的基因外还必须有____、____以及____等。（3）通常用____方法检测新育出的植株染色体DNA上是否插入了抗菌肽基因。

（1）PCR ②①③（2）制备重组DNA分子（基因表达载体的构建）启动子 终止子标记基因（3）（DNA）杂交法解析对目的基因扩增通过采用PCR技术，DNA扩增先变性解链，再复性连接上引物，最后在DNA聚合酶作用延伸扩增。基因工程操作步骤为提取目的基因，基因表达载体的构建，完整的基因表达载体由启动子、目的基因、终止子、标记基因构成，通常还应有复制原点，目的基因导入受体细胞，目的基因检测与表达，通常采用DNA杂交技术进行检测。利用抗原—抗体反应或个体水平检测是否表达。

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