这是我设计的罗非鱼GAPDH基因的引物，各位高手看看有没有什么问题啊？最近我跑RT-PCR老失败！

答案:2 悬赏:70 手机版

解决时间 2021-04-03 07:25

提问者网友：皆是孤独
2021-04-02 23:58

最佳答案

五星知识达人网友：西岸风
2021-04-03 01:31

做RT首先确定RNA没有问题，这是前提；然后你这对引物，即使是直接扩增DNA也比较困难，给你俩建议，第一，尽量把突变的碱基放在最5端的位置，你的下游引物突变点有点靠近中间了，不是特别好；第二，把你的引物加长一些或者是设置在GC含量相对高一点的位置以使其退火温度高于60度，这样只要你的RNA没有问题就一定做得出来。你要想用现在的这对引物可以，建议你换好的酶，不然不好做。PP并不是设计引物好的软件，但不知道为什么国内都用它，其实它很业余。追问请问你一般用什么软件设计引物呢，能推荐一下吗？追答OLIGO 6.0或者7.0或者更高版本。

全部回答

1楼网友：执傲
2021-04-03 01:48

引物中间怎么有不一样的空格呢？还是要避免的好，和目的序列成对应。你的引物应该没有其他问题追问这是我自己突变了一个碱基的追答问题不大，试一下。不可以的话再重新设计

我要举报

如以上问答信息为低俗、色情、不良、暴力、侵权、涉及违法等信息，可以点下面链接进行举报！