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DNA连接反应中如何确定供体DNA与载体DNA的加入量?

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解决时间 2021-12-30 12:55
DNA连接反应中如何确定供体DNA与载体DNA的加入量?
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一般载体和目的片段摩尔比是1:3~1:10,也不是一定的。
关键要看你载体、目的片段的大小以及跑胶出来的亮度,还有MARKER。
比如载体4kb,片段2kb,1bpDNA约660D,你对ligase照说明书可以算一下需要多少微摩,再算一下需要多少ngDNA。再看跑的胶,比如点了5ul的marke5kb条带是100ng,亮度和载体相同,是目的片段的两倍,那么载体一共大概有100ng,目的片段50ng。
再根据说明书上需要加的量加DNA。不懂追问啊。
全部回答
你好! 嗯,用不同的载体,可能加入量的比例不同,两者的比例挺重要的,你在实验之前先仔细看一遍说明书。 希望对你有所帮助,望采纳。
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