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有目的基因,293t细胞,如何用慢病毒载体整合入293t细胞,

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解决时间 2021-05-19 04:42
有目的基因,293t细胞,如何用慢病毒载体整合入293t细胞,
最佳答案

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):
第一天:
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天:\x09\x09\x09
1.转染293FT细胞.
1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2.500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3.5min后,将,溶液混合,室温静止30min\x09
4.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.
2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+
10%FBS(从此刻开始算时间).
第三天:
3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上
第四天:
4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4.感染细胞:用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.
第五天:
5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.
6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.
再问: 2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G 这是什么东西?你的内容是包装试剂盒说明书上的吧,我要自己包装,但很多试剂我没有,比如Opti-MEM 脂质体2000


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