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重组质粒如何鉴定

答案:2  悬赏:60  手机版
解决时间 2021-04-05 04:54
哪位大侠详细帮我介绍一下重组质粒的鉴定方法有哪些?要有过程的哦.谢谢哦。
比如说质粒含有两个标记基因抗青霉素也抗四环素,目的基因插入到抗四环素基因中。实验步骤:
1.在一个平板上加入青霉素,则生长起来的是导入质粒的菌落,但这些质粒有可能是空质粒,有可能是导入目的基因的质粒。
2.再拿六个平板,都加入四环素,分别在上一个平板上挑取单菌落,并分别图在六个平板上,不生长的对应菌落则是插入目的基因的质粒。
大侠这之后是不是就可以断定哪个是插入目的基因的菌落了?还用进一步断定吗?我看他们还有交公司测序的,什么作用?公司会给他们什么东西?测序图?什么样子?
呵呵问题有些多,谢谢
最佳答案
是区分重组质粒与普通质粒吗?
如果是,最2113简单的方法就是用探针进行DNA分子5261杂交
另外还有种方法,当普通质粒上有两个或以上的标记基因,而目的基因的拼接处正好破坏4102一个标记基因就可以
如:普通质粒,抗青霉素也抗四环素,但目的基因正1653好插入时破坏了抗四环素基因,那么,双抗的就是专导入普通质粒,只抗青霉素而不抗四环属素的导入的就是重组质粒,都不抗的没有导入质粒。
全部回答
既然你的质粒已经提出来了,那么感受态、转化等因素就不必再考虑了。 你看看双酶切后载体的位置有几条带,如果是两条,那说明酶切不完全,如果是一条,那说明酶切效率没问题。 pet28a分子量为5.6k,你的插入片段为500bp,如果你的质粒完全切开,载体和插入片段的摩尔比为1:1,质量比就是5.6k:0.5k,跑胶后两条带的亮度比就是10:1,所以你目的条带很淡非常正常。 换句话说,你的实验一切正常,那条500bp的条带可能本来就应该那么淡。
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