如何排除一个蛋白是否是一个基因的转录因子

如何排除一个蛋白是否是一个基因的转录因子

1你要纯化蛋白并对其进行序列和结构分析，
2你要将蛋白的和DNA的结合部位找到（ChIP可以做到，需要的是能制备蛋白的抗体）
3 酵母单杂交，在报告基因上游克隆你的蛋白结合的启动子，将你的目标蛋白加入体系看能否表达，表达就说明是转录因子，否则不是。
当然，可能你的目标蛋白不能和DNA结合，那么你在做ChIP的时候就会发现没有DNA与蛋白的结合，也可能你的蛋白只和DNA结合但不能激活转录的起始，这就需要你通过蛋白的结构将蛋白质的DNA结合区与一广谱转录激活因子结合，从而验证其功能。
ChIP：染色体免疫共沉淀
第一步：用甲醛在体内将DNA结合蛋白与DNA交联
第二步：分离染色体（质），剪切后的DNA小片段与结合蛋白结合
第三步：用特异性抗体与DNA结合蛋白结合，用沉淀法分离复合体。反向交联操作释放出DNA，并消化蛋白质
第四步：用PCR扩增特异DNA序列，以确定是否与抗体共沉淀