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提取生物大分子的基本思路是什么?对于dna的粗提取而言

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解决时间 2021-03-07 03:58
提取生物大分子的基本思路是什么?对于dna的粗提取而言
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提取生物大分子的基本思路是将被分离的生物大分子与其他物质分开,并加以纯化。

在DNA的粗提取实验中,其原理是DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低,而蛋白质此时的溶解度高的特点,可以使DNA与蛋白质分离,形成沉淀析出,通过过滤,得到粗提取的滤出物DNA。再利用DNA不溶于酒精,但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点,进一步提取出含杂质较少的DNA。
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首先最重要的一点是保证大分子物质不变性,否则分离纯化的工作将毫无意义,对于分离dna,如果是从生物体中直接提纯,要注意提取溶液的浓度,根据你所想要的A型或者B型来选配盐水,ph当然很重要,稍微偏碱性有利于提纯.如果从rna和dna的混合物种分离,直接使用弱碱性的缓冲液进行电泳就行.
此外,就是要提取周期短.周期越长提取效果越差
步骤尽量简洁.过于繁琐的步骤会让生物大分子活性降低,尤其提取酶的时候尤其重要
当然一定的纯度也是必须的考虑因素,根据实验需要,提纯也需要不同的纯度,自然方法有差异
提纯过程中的副产物也是需要考虑的因素.要保证他们不能影响提纯工作的进行
需要注意生物大分子的特性
①在水和各种有机溶剂中的溶解性。
②在不同温度、pH 值和各种缓冲液中生物大分子的稳定性。
③固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性。
④各种物理性质:如分子的大小、穿膜的能力、带电的情况、在电场中的行为、离心沉降的表现、在各种凝胶、树脂等填料中的分配系数。
⑤其他化学性质:如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各种化学试剂的稳定性。
⑥对其他生物分子的特殊亲和力。
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