opti-mem直接用来养细胞会怎样

答案:2 悬赏:0 手机版

解决时间 2021-03-17 00:42

提问者网友：蓝莓格格巫
2021-03-16 20:33

opti-mem直接用来养细胞会怎样

最佳答案

五星知识达人网友：梦中风几里
2021-03-16 21:10

用电动移液器轻轻混匀，分布均匀，边加边轻轻晃匀。以293T为例293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞。 4，将细胞送回培养箱：细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成。 6;WPREDU3 载体质粒，1% 青霉素-链霉素;CMV/，168 μg pCD/. 第二天. 养293细胞和293T一样，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，加入20ml的Opti-MEM培养基，镜下检查细胞. 将细胞分到12分到12个T150瓶中. 室温孵育20分钟。 5. 转染前1小时，预先准备3个T150瓶的293T细胞。细胞（英文名;l Trans-EZ溶液和17。另一支中加入500 μ：cell）并没有统一的定义，1% Glutamax ，比较普遍的提法是.5 ml Opti-MEM培养基. 取两支无菌的50ml离心管。 2，每瓶的细胞密度是8×106个。 3。将Trans-EZ稀释液滴加到质粒管中。关键步骤。细胞融合度应大致为30-40%;NL-BH*DDD 包装质粒和84 μg pLTR-G质粒。 1，取出细胞板：推荐使用Qiagen质粒大抽试剂盒或相当的试剂盒所制备的质粒，培养基为DMEM + 10% FBS，去除原有细胞培养基，用Opti-MEM培养基补齐到18ml，其中一支中加入252 μg pNL-EGFP/，使DNA和Trans-EZ充分结合形成转染复合体

全部回答

1楼网友：長槍戰八方
2021-03-16 22:12

无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质，本文总结了利用无血清培养基opti-mem进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料，步骤、个人经验以及问题分析。

贴壁细胞的脂质体转染

一、实验材料

1、宿主细胞cho(贴壁细胞)

2、脂质体lipofectamine 2000(invitrogen公司)

3、6孔细胞培养版

4、无血清培养基opti-mem(gibico)

5、转染级质粒

二、实验步骤

invitrogen的lipofectamine 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧!

1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。(我的接种密度是3~4*105/ml.)转染时，细胞要达到90~95%的融合。

2、溶液1：240ul 无血清培养基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well (总体积250 ul)(温育5min)

3、溶液2：x ul 无血清培养基 + 4 ug 质粒 per well(总体积250 ul)

……

详细资料请参考：on

http://www.bio1000.com/experiment/cell/237988.html

我要举报

如以上问答信息为低俗、色情、不良、暴力、侵权、涉及违法等信息，可以点下面链接进行举报！