关于革兰氏阴性细菌原生质体制备的问题

革兰氏阴性菌的细胞壁不同于革兰氏阳性菌，其细胞壁中除了含有肽聚糖外，还含有脂类层，使得原生质体的制备比较困难，真正的原生质体很难获得。Weiss R等用溶菌酶和EDTA处理。 影响原生质体制备的主要因素有: 〖1〗菌体的前处理: 〗菌体的前处理: 为提高细胞壁对酶的敏感性,可以对菌体进 行必要的处理,如在细菌中加入EDTA, 请问，这个EDTA是如何使用。是在菌体培养的时候加入，还是EDTA与酶混合一起作用细胞壁？

需在培养的时候加入，在此过程中若加入足够多的EDTA，则能激活全部的细胞壁对酶的敏感性，此时再加入酶，则能充分的溶解细胞壁，使得原生质体的纯度足够高。。

革兰氏阴性菌要获得其原生质体要比阳性菌复杂得多，因为其细胞壁不仅有肽聚糖，还有脂多糖等等。 一般来说要获得其原生质体需要在培养细菌过程中加入足够量的edta以此来激活其细胞壁对于溶菌酶的活性，再用溶菌酶来处理获得。 用来研究用的革兰氏阴性菌一般被制成球状体（原生质球），即保留一部分细胞壁的革兰氏阴性菌。