沉淀DNA时,用到的醋酸铵溶液pH是多少
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解决时间 2021-02-10 12:17
- 提问者网友:孤山下
- 2021-02-09 16:22
沉淀DNA时,用到的醋酸铵溶液pH是多少
最佳答案
- 五星知识达人网友:三千妖杀
- 2021-02-09 17:23
沉淀DNA时,用到的醋酸铵溶液pH在8左右,略微碱性。
DNA的沉淀:
采用无水乙醇沉淀DNA是实验室的常用方法。
在DNA溶液中,DNA分子与水分子呈水合状态,当加入乙醇后,乙醇可以夺去DNA分子周围的水,从而使得DNA分子失水而易于聚合。 乙醇的优点是可以任意比和水融合,而且不会和DNA发生化学反应,DNA分子在乙醇中能够稳定保存,因此可以作为沉淀DNA的良好试剂。
一般用2倍体积的无水乙醇沉淀DNA,使乙醇最终含量为67%左右(关键)。当沉淀RNA时一般用2.5倍的体积。因此也可以用95%的乙醇等代替,但是此时终体积将会较大,且DNA在溶液中会有一定的损耗。因此当多次沉淀时,做好采取折中的方法,即初次用95%的乙醇沉淀后,之后采用无水乙醇代替。
另外也可以用0.6倍体积的异丙醇(IPA)沉淀。与乙醇相比,异丙醇比较疏水,极性较弱,因此盐离子会与DNA分子共沉淀,不利于去盐,但却因此可以去除蛋白质、糖等杂质(高浓度的盐可以使糖存在于溶液中从而去除)。而乙醇可以有效去除盐离子。另外,乙醇易挥发,所以通常会先用异丙醇沉淀,再用乙醇多次洗去盐。
沉淀时间一般是15-30分钟即可。
沉淀过程中一般会加入醋酸钠或氯化钠,因为在pH为8时,DNA分子带负电荷,盐释放的正电荷可以与其反应,从而促进其聚合沉淀。当然盐离子浓度也不可太高,否会影响后续反应,如酶切等,故得多次脱盐。
DNA的沉淀:
采用无水乙醇沉淀DNA是实验室的常用方法。
在DNA溶液中,DNA分子与水分子呈水合状态,当加入乙醇后,乙醇可以夺去DNA分子周围的水,从而使得DNA分子失水而易于聚合。 乙醇的优点是可以任意比和水融合,而且不会和DNA发生化学反应,DNA分子在乙醇中能够稳定保存,因此可以作为沉淀DNA的良好试剂。
一般用2倍体积的无水乙醇沉淀DNA,使乙醇最终含量为67%左右(关键)。当沉淀RNA时一般用2.5倍的体积。因此也可以用95%的乙醇等代替,但是此时终体积将会较大,且DNA在溶液中会有一定的损耗。因此当多次沉淀时,做好采取折中的方法,即初次用95%的乙醇沉淀后,之后采用无水乙醇代替。
另外也可以用0.6倍体积的异丙醇(IPA)沉淀。与乙醇相比,异丙醇比较疏水,极性较弱,因此盐离子会与DNA分子共沉淀,不利于去盐,但却因此可以去除蛋白质、糖等杂质(高浓度的盐可以使糖存在于溶液中从而去除)。而乙醇可以有效去除盐离子。另外,乙醇易挥发,所以通常会先用异丙醇沉淀,再用乙醇多次洗去盐。
沉淀时间一般是15-30分钟即可。
沉淀过程中一般会加入醋酸钠或氯化钠,因为在pH为8时,DNA分子带负电荷,盐释放的正电荷可以与其反应,从而促进其聚合沉淀。当然盐离子浓度也不可太高,否会影响后续反应,如酶切等,故得多次脱盐。
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