【dna提取步骤】DNA提取的原理?

【dna提取步骤】DNA提取的原理?

【答案】 原理：
　　1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA.
　　2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA.
　　3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色.
　　方法步骤：
　　1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌,稍快,稍重.5 min
　　2．溶解DNA：
　　3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢
　　4．过滤：取黏稠物
　　5．再溶顺时针方向搅拌,较慢.3 min
　　6．过滤：取滤液.
　　7．提取出含杂质较少的DNA,逆时针方向搅拌,稍慢.5 min
　　8．DNA的鉴定：沸水浴5min
　　大学：
　　DNA提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别.
　　利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂.
　　加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA结合的组蛋白.
　　将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分.
　　另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒.
　　2.细胞的破碎
　　细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞.方法有三种;①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎.
　　3.DNA提取的几种方法
　　(1).浓盐法
　　A.利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
　　B.也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
　　两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
　　C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离.在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.（2）.阴离子去污剂法; 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA
　　（3）.苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA .此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出.此法的特点是使提取的DNA保持天然状态
　　（4）.水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
　　结果就是得到DNA

好好学习下