农杆菌L4S1多久保存一次，我划得的板怎么没有长单克隆的，什么原因？

农杆菌L4S1多久保存一次，我划得的板怎么没有长单克隆的，什么原因？

-80℃的甘油菌可保存1年以上
4℃的菌板可保存1个月
4℃菌液可保存1周（但菌液我个人的看法是当天摇好的当天用，不保存）
培养单菌落（单克隆）的方法：
1、可以将菌浓度稀释了之后涂布，稀释方法如：取5个1.5ml离心管，各加入45ul液体培养基，向1号离心管加入5ul甘油菌用枪混匀后取出5ul加入到2号离心管再混匀，如此直到5号离心管取5ul滴在固体培养基上，用三角玻璃棒涂布
2、划线法，多为三分法四分法，也可人为多分几个区，越往后的区域菌为单细胞的几率越大
3、提高培养基中抗生素的浓度
4、降低培养温度为19~22℃，培养1~3天直至长出单菌落
也可以以上四种方法结合着做。