为什么流式细胞术多色分析时要进行荧光补偿调整

为什么流式细胞术多色分析时要进行荧光补偿调整

随着对FCM研究的日益深入，其价值已经从科学研究走入了临床应用 阶段，在我国临床医学领域里已有着广泛的应用。可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定，以及免疫学研究，并已开始用于细菌鉴定，病毒感染细胞的识别和艾滋病感染者T4、T8细胞的记数。
自70年代以来，随着流式细胞技术水平的不断提高，其应用范围也日益广泛。流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域。
在肿瘤学中的应用
这是FCM在临床医学中应用最早的一个领域。首先需要把实体瘤组织解聚、分散制备成单细胞悬液，用荧光染料(碘化吡啶PI)染色后对细胞的DNA含量进行分析，将不易区分的群体细胞分成三个亚群(G1期，S期和G2期)，DNA含量直接代表细胞的倍体状态，非倍体细胞与肿瘤恶性程度有关。

现在的机器都是自动调节，不过也要做好准备工作。我大致说一下原理。 做补偿调节，需要以下的样本，无任何染色的样本，分别是fitc， pe， percp还有apc单染阳性的样本，所以你这里需要一共5个管子。 在纯手工的年代，你需要画出这四个颜色两两配对的散点图，比如fitc-pe， fitc-percp， fitc-apc， pe-percp，pe-apc， percp-apc，这一共6个散点图。 然后，先上未染色的样本，调节各个荧光通道的电压，是细胞都位于各个散点图的左下角。 在记录前，把每个样本都先跑一边，目的是观察电压的设置是否正确。比如fitc和pe会有重叠，上fitc阳性管的时候，虽然其他通道会有些信号，但fitc通道的信号应该最强。如果发生了其他通道信号强于目的通道的情况，就要进一步调节电压，是目的通道的信号最强。这样把每一个单染的样本都过一遍，确保目的通道的信号最强。 现在的仪器软件，不需要你自己画这些散点图，但是调剂电压的这一步是必须的，可以在阴性对照管的页面下完成。 电压调节好以后，记录阴性对照和阳性单染样本的信号，然后机器会自动结算补偿值。 如果你要手工计算，这里是原则： 以fitc-pe为例。在散点图上，划分为四个象限。如果纵坐标是fitc， 横坐标是pe。调节电压后，阴性的细胞位于左下象限。这是可以得出阴性细胞横坐标（pe）和纵坐标（fitc）的平均荧光强度值。电压调好以后，上单色阳性样本。比如上牌fitc阳性，这时不要再改变电压了，而是调节补偿系数，最终目的就是让fitc阳性的细胞都位于向下象限，并且该细胞团的纵坐标（pe）荧光强度和阴性细胞团的值一致。其他颜色的两两补偿以此类推。