最近在基因连接PMD18T 克隆载体,做转化长菌,但是却摇不来菌,或者摇起来,提质粒跑电泳没东西,这是怎么回事?
答案:2 悬赏:0 手机版
解决时间 2021-02-17 11:21
- 提问者网友：送舟行
- 2021-02-17 03:47
最近在基因连接PMD18T 克隆载体,做转化长菌,但是却摇不来菌,或者摇起来,提质粒跑电泳没东西,这是怎么回事?
最佳答案
- 五星知识达人网友：英雄的欲望
- 2021-02-17 04:35
pMD18T连一段多长的DNA，连接DNA用量及时间？转化到哪个感受态细胞中？Amp抗性平板长菌情况如何？
仔细观察以上问题，考虑是否转化不成功。
培养基的体积是否小于试管体积的1/5？摇菌转数是否达到250rpm，试管要斜放？
是否观察过菌体生长过程（2-6小时生长情况），是否有噬菌体污染？
如果转化成功，则需要考虑菌体生长环境。
仔细观察以上问题，考虑是否转化不成功。
培养基的体积是否小于试管体积的1/5？摇菌转数是否达到250rpm，试管要斜放？
是否观察过菌体生长过程（2-6小时生长情况），是否有噬菌体污染？
如果转化成功，则需要考虑菌体生长环境。
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- 1楼网友：独行浪子会拥风
- 2021-02-17 05:49
你加抗生素了吗？摇了多久？追问加了氨苄，摇菌13h.追答摇太久了吧 或者抗生素有问题 当培养基中没有抗性时，大肠会逐渐丢失细胞内含有的抗性质粒
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