在引物设计时，长度超过25bp时，其PCR退火温度怎么确定？
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解决时间 2021-02-24 16:51
- 提问者网友：辞取
- 2021-02-24 06:33
在引物设计时，长度超过25bp时，其PCR退火温度怎么确定？
最佳答案
- 五星知识达人网友：污到你湿
- 2021-02-24 07:21
一般不要超过25BP.一个是合成易不纯，一个是过长引物不适合测序但是扩增PCR可以.要是想确定退火温度.可以对设计引物软件的引物长进行修改，一般测序设计软件设置为1-25BP碱基.你可以修改为1-30BP碱基.这样软件直接读取.还有就是楼下所说实验摸索.更改实验条件等.
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- 1楼网友：孤独的牧羊人
- 2021-02-24 08:51
没啥不好确定的，你还是用引物设计软件计算Tm值，然后做实验的时候退火温度差不多比Tm值低个2～3度，效果不佳就加减6度范围内找一下最佳退火温度，一般退火温度都是需要实际实验摸索出来的
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